流感病毒减毒活疫苗（LAIV）通过滴鼻感染途径接种,既能够诱导产生血清中和抗体,又能刺激粘膜免疫应答。目前上市的LAIV以鸡胚为培养基质生产。鸡胚作为生产基质,除了其供应周期制约着疫苗的生产能力之外,还存在着可能因为接种活疫苗引入外源因子污染的风险。Vero细胞是人用生物制品生产普遍采用的细胞基质,但在Vero细胞上进行流感病毒培养时,不同毒株间产量差异大或不能连续传代。目前,国际上仅见对甲型流感Vero细胞适应株的研究,尚未见乙型流感Vero细胞适应株的研究。本研究首先以乙型流感病毒Vero冷适应株BVca作为母本株,与2017-2018年BV系流行株B/上海松江/1173/2017（BV-W）通过反向遗传学重配。重配过程中,以primer cocktail同时克隆乙型流感8基因片段,同源重组的方式连接pHW2000构建乙型流感病毒阳性筛选系统,建立了高效、快速的反向遗传学拯救技术。将流行株HA、NA和母本株6个内部基因片段拯救出乙型流感Vero细胞冷适应株BWVca,该重配毒株可在Vero细胞上25℃连续传代,具有冷适应性（cold-adapted,ca）、温度敏感表型（temperature sensitivity,ts）以及减毒特性（attenuation,att）,在优化的培养条件下病毒滴度可达7.5 LgTCID50/mL,可作为乙型流感减毒活疫苗备选株。减毒活疫苗在接种人体后与野毒株的重配引起人们的担心。流感病毒基因组含有8个节段,当两个不同毒株同时感染同一个细胞时,随机重配会出现256种组合。本研究中,由于所选毒株具有相同的表面抗原,我们将研究重点集中在流感病毒的核糖核蛋白复合体（RNP）的构成基因PB1、PB2、PA、NP中,并将M、NS以单个或同时互换的方式进行组合。将减毒株BWVca与野毒株BV-W的基因片段逐个互换,重配获得34株重组病毒。通过对34株病毒是否具有att特性,对毒株的生物安全性进行评定。在34株病毒中,11株病毒具有部分att特性（符合att判定标准但肺组织有病毒载量）,23株病毒具有完全att特性。通过这些结果,我们证明了疫苗备选株BWVca作为疫苗备选株具有生物安全性,同时首次证明了母本株BVca可以作为乙型流感减毒活疫苗的供体株。鸡胚流感减毒活疫苗Flumist（?）由于在2013-2016流感季免疫效力较低,在2016年被免疫实践咨询委员会（ACIP）建议停用,减毒活疫苗免疫增强研究成为了热点。我们在本研究中将制备的减毒活疫苗与免疫增强剂PolyI:C、鞭毛蛋白FLIC以及2种CpG ODN结合,发现我们制备的流感减毒活疫苗与FLIC或PolyI:C佐剂同时免疫小鼠后,能够增强疫苗的交叉保护效果,将同系病毒保护率分别提高30%和20%,将异系病毒保护率分别提高40%和30%。本研究在优化反向遗传学技术基础上,通过减毒母本毒株与流行株重配获得含有流行株有效表面抗原,并保持母本毒株ts、ca和att表型特征的重配毒株,能够用于Vero细胞流感减毒活疫苗生产;进一步将减毒株与野毒株的部分随机重配,证明了减毒活疫苗使用不会导致毒力的返祖;添加佐剂能够增强流感减毒活疫苗交叉保护性。