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目的:恶性肿瘤的浸润及转移是造成病人死亡的重要原因,为揭示恶性肿瘤浸润、转移机制,本研究通过对食管癌组织中VEGF、CD34、COX-2、nm23mRNA表达的检测,探讨VEGF、COX-2、nm23在食管癌生长、浸润、转移过程中的作用及其相互关系,为食管癌的生物学行为以及中晚期食管癌的生物学治疗提供理论依据。方法:1采用手术后的食管癌组织标本,其中癌组织35例、正常食管黏膜组织6例作对照。2应用免疫组织化学技术(SP法)测定正常食管黏膜、食管癌组织中VEGF蛋白和CD34蛋白标记的微血管密度(MVD)。3应用流式细胞术定量测定正常食管黏膜及食管癌组织中COX-2蛋白的表达。4应用原位杂交技术测定正常食管黏膜、食管癌组织中nm23mRNA的表达。5图像分析:采用HPIAS-1000病理图文分析系统,对切片上的染色信号进行灰度分析。6 统计学处理:双侧student’t检验,直线相关分析,检验水准为0.05。<WP=4>结果:1免疫组织化学技术分析结果1.1 VEGF蛋白的分析结果:正常食管黏膜上皮微量表达;高分化鳞状细胞癌、中分化鳞状细胞癌、低分化鳞状细胞癌的表达净灰度值依次增加,高、低分化表达间存在统计学意义上的差别(P<0.05),中、低分化表达间存在统计学意义上的差别(P<0.05),高、中分化间表达无统计学意义上的差别(P>0.05)。正常食管黏膜的VEGF的净灰度值低于癌组织的净灰度值,二者间存在统计学意义上的差别(P<0.05)。VEGF在有淋巴结转移的病例中的净灰度值高于无淋巴结转移的病例(P<0.05)。VEGF的表达量与性别、发生部位、大体类型、浸润深度无关。1.2 MVD结果:CD34阳性细胞计数的MVD在正常食管黏膜、癌组织中依次增高; MVD在高、中、低分化的鳞状细胞癌中依次增高,存在统计学意义上的差异(P<0.05)。MVD值在有淋巴结转移的病例中高于无淋巴结转移的病例(P<0.05)。MVD值与性别、发生部位、大体类型、浸润深度无关。2流式细胞技术检测结果 COX-2基因蛋白在正常食管黏膜、食管鳞状细胞癌中的表达依次增加,存在统计学意义上的差异(P<0.05);高、中、低分化的鳞状细胞癌中依次增高,存在统计学意义上的差异(P<0.05)。COX-2的表达与性别、发生部位、大体类型、浸润深度及淋巴结转移无关(P>0.05)。3原位杂交技术检测结果<WP=5>nm23mRNA在正常食管黏膜、鳞状细胞癌组织中的表达依次降低,二者间存在统计学意义上的差异(P<0.05);在淋巴结转移的组织中低于无淋巴结转移的组织(P<0.05); nm23mRNA的低表达与性别、发生部位、大体类型、浸润深度无关(P>0.05)。4相关关系分析结果VEGF的表达与MVD及COX-2的表达呈正相关,MVD与COX-2的表达呈正相关,nm23mRNA的表达与VEGF、MVD及COX-2的表达无相关性。结论1 VEGF蛋白的表达在正常食管黏膜、鳞状细胞癌中的表达逐渐增多,在鳞状细胞癌的高、中、低分化逐渐增多,在淋巴结转移病例中表达增高,提示VEGF的高表达是鳞状细胞癌的高度恶性及淋巴结转移的标志。2 CD34标记的MVD在正常食管黏膜、鳞状细胞癌中的表达逐渐增多,在鳞状细胞癌的高、中、低分化逐渐增多,在淋巴结转移病例中增高,提示MVD的数量增多是食管鳞状细胞癌的高度恶性及淋巴结转移的标志。3 COX-2蛋白在正常食管黏膜、鳞状细胞癌中的表达逐渐增多,在鳞状细胞癌的高、中、低分化逐渐增多,在淋巴结转移病例中增高,提示COX-2的表达增多是食管鳞状细胞癌的高度恶性及淋巴结转移的标志。nm23mRNA的表达在正常食管黏膜、鳞状细胞癌中的表达逐渐降低,在淋巴结转移病例中降低,提示<WP=6>4 nm23mRNA的低表达是食管鳞状细胞鳞巴结转移的标志。5 VEGF蛋白的表达与MVD、COX-2的表达呈正相关,MVD与COX-2的表达呈正相关,nm23mRNA的表达与VEGF、MVD及COX-2的表达无相关性提示正常食管黏膜细胞癌变后产生大量的VEGF,VEGF高表达增加了VEGF参与的肿瘤血管的生成,COX-2可能通过与VEGF的作用,也可能单独作用参与食管癌肿瘤性血管的形成,nm23在抑制食管癌的浸润与转移的途径可能与抑制血管的形成途径无关