论文部分内容阅读
目的：
评价阿霉素所致新生大鼠原代心肌细胞的毒性作用，以及评价七氟烷对阿霉素诱导新生大鼠原代心肌细胞损伤的影响。
方法:
取出生24 h内的SD大鼠10只，培养大鼠原代心肌细胞，48h后采用免疫荧光染色鉴定心肌细胞。
将心肌细胞培养48h后，消化心肌细胞，制成细胞悬液，调整细胞浓度为5×104个/ml，将心肌细胞接种于96孔细胞培养板（200μl/孔）或6孔细胞培养板（2 ml/孔），采用随机数字表法将细胞随机分为4组(n=15):正常对照组(C组)、阿霉素组（D组）、七氟烷组（S组）和阿霉素+七氟烷组（DS组）。
D组和DS组加入1μmol/L阿霉素孵育，C组和S组加入等容量PBS，孵育24h时，S组和DS组暴露于2.4％七氟烷2h。每组于停止给予七氟烷后继续培养2h，通过MTT法测定细胞活力、ELISA法测定培养液肌钙蛋白(cTnI)和氨基末端B型利钠肽前体(NT-proBNP)浓度，免疫组化法测定Bax和Bcl-2蛋白表达水平，计算Bax和Bcl-2的比值（Bax/Bcl-2）。
结果:
1.形态学观察:与C组相比，D组新生大鼠原代心肌细胞搏动减慢，生长停滞，细胞内空泡、颗粒增多，DS组大鼠心肌细胞搏动有所减弱，生长比较缓慢，同时细胞内空泡、颗粒增多，S组心肌细胞形态无明显改变;与D组相比，DS组细胞搏动增强，细胞内空泡、颗粒减少。
2.原代心肌细胞活力测定:台盼蓝法和MTT法。
(1)台盼蓝法测定新生大鼠原代心肌细胞平均存活率为95％。
(2) MTT结果:与C组比较，D组、DS组MTT值降低(P＜0.05)，S组细胞活力差异无统计学意义（P＞0.05）;与D组比较，DS组MTT值略微升高，但差异无统计学意义(P＞0.05)。
3.培养48h后采用免疫荧光法鉴定新生大鼠原代心肌细胞纯度为83％。
4.免疫细胞化学测定Bax、Bcl-2蛋白表达水平:与C组比较，Bcl-2蛋白表达降低，Bax蛋白表达和Bax/Bcl-2比值升高（P＜0.05），S组和DS组以上各指标的比较差异无统计学意义(P＞0.05);与D组比较， DS组Bcl-2蛋白表达升高，Bax蛋白表达和Bax/Bcl-2比值降低(P＜0.05)。
5.ELISA法测定培养液cTnI和NT-proBNP浓度:与C组比较，D组培养液cTnI和NT-proBNP浓度升高(P＜0.05)，S组和DS组以上各指标的比较差异无统计学意义(P＞0.05);与D组比较，DS组培养液cTnI和NT-proBNP浓度降低（P＜0.05）。
结论:
阿霉素可诱导新生大鼠原代心肌细胞发生凋亡，其机制可能与凋亡蛋白Bax与抗凋亡蛋白Bcl-2以及两者的比值有关;
原代大鼠心肌细胞暴露于浓度为2.4％的七氟烷密封箱内2h，心肌细胞无明显改变;
七氟烷可减轻阿霉素诱导的原代心肌细胞损伤，其减轻这种损伤的机制可能与抑制细胞凋亡有关。