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沙丁胺醇能选择性激动支气管平滑肌的β-受体,是选择性β-受体激动剂的一种,广泛用于治疗支气管哮喘。沙丁胺醇等β-兴奋剂还可以用作畜禽等的促生长剂,但是因为β-兴奋剂易在动物脏器中积聚残留,还会通过食物链进入到人的机体内部,严重影响甚至危害到人类健康,现在已经禁止在畜禽生产中将β-兴奋剂作为促进动物生长的饲料添加剂。“瘦肉精”克伦特罗的滥用引起有关方面的重视,国内外均己研究出快速有效的检测方法对其进行监测,沙丁胺醇作为克伦特罗的代替品具有同样促生长效果,而检测手段研究相对滞后,成为不法分子谋取经济利益的新手段,因此,建立快速、简单、方便、有效的检测手段是控制沙丁胺醇非法使用的迫切需要。本研究在分析沙丁胺醇免疫学特性的基础上,运用单克隆抗体技术制备其单抗,组装了胶体金试纸和FITC荧光免疫层析试纸,主要研究结果如下:1.沙丁胺醇人工抗原的制备与鉴定采用混合酸酐法将沙丁胺醇(SAL)偶联于载体牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA),合成免疫原SAL-BSA和包被原SAL-OVA,并利用紫外扫描(UV)和SDS-PAGE凝胶电泳进行鉴定,紫外扫描图谱显示合成的人工抗原的最大吸收峰发生偏移,证明偶联成功,SDS-PAGE结果表明BSA的泳动速度大于SAL-BSA,说明SAL-BSA的分子量大于BSA,进一步说明SAL与BSA偶联成功。2. SAL单克隆抗体的制备及免疫学特性鉴定用SAL-BSA免疫Balb/C小鼠4只,血清效价检测后选出细胞融合小鼠1只,将免疫小鼠脾细胞与NS0瘤细胞进行细胞融合,运用杂交瘤技术建立了分泌SAL单克隆抗体(mAb)的细胞株。经检测、筛选、克隆化后,获得4D3E7一株特异敏感的杂交瘤细胞株,用体内诱生腹水法制备SAL mAb,经鉴定4D3E7对SAL的IC50为1.35μg/L,与克伦特罗的交叉反应率为9.25%,与其他同类物无交叉反应。本实验制备的SAL mAb可用于SAL残留检测的免疫学试验。3.沙丁胺醇免疫快速检测试纸的研发应用胶体金免疫层析试验(GICA)原理,分别组装了快速检测免疫金标试纸(SAL-Strip)和FITC免疫荧光试纸。可用于检测尿液中沙丁胺醇的残留,试纸条可以在8到10min内完成。两种产品均具有快速、敏感、特异、简便等特点,可以广泛的用于对沙丁胺醇残留的定性、半定量和定量检测。