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山羊传染性胸膜肺炎(Contagious Caprine Pleuropneumonia,CCPP)是由山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasma capricolum subsp.capripneumoniae,Mccp)引起的一类严重呼吸道疫病,主要危害山羊和一些野生羊,被世界动物卫生组织(OIE)列为报告动物疫病之一。CCPP流行区域横跨亚洲、中东、非洲40多个国家,主要表现为呼吸系统症状,与小反刍兽疫、巴氏杆菌病以及绵羊肺炎支原体羊肺炎等多种疫病症状相似,且临床表现多样、复杂,需要通过实验室诊断才能确诊。由于Mccp与丝状支原体簇其他成员关系密切,CCPP准确诊断一直是本病防控的关键技术难题之一,特异、敏感的诊断方法是研究工作中最具挑战性的一个方面。挖掘Mccp特异性诊断分子,进而建立准确、有效的诊断方法来研发诊断试剂,是有效防控CCPP的技术支撑条件之一。本研究主要通过两条途径挖掘CCPP新诊断分子。途径一是通过比较基因组学方法,先筛选得到Mccp理论上特异的基因序列,然后,一方面优选潜在的特异性抗原基因序列87.1,利用原核表达技术,获得该基因的重组蛋白,再通过WB、iELISA评估重组蛋白87.1的特异性和反应原性,评价重组蛋白87.1是否可作为CCPP新的血清学诊断靶标;另一方面优选特异性基因序列92.1,作为靶序列设计引物92.1F/R,通过普通PCR方法评估该引物的特异性,评价序列92.1是否可作为CCPP新的核酸诊断靶标。途径二是以Mccp以及与其亲缘关系较近的支原体作为抗原筛选特异性单抗,经过小鼠免疫、杂交瘤细胞制备、细胞筛选、腹水制备纯化等单抗制备过程,优选单抗7H11作为指示抗体,通过建立阻断ELISA(bELISA)方法评估该单抗的特异性以及应用可能性,评价单抗7H11是否可作为CCPP新的血清学诊断分子。结果表明:重组蛋白87.1在WB、iELISA中与Mccp阳性血清可发生反应,而且87.1-iELSIA能够反映血清中Mccp抗体水平的变化,不与丝状支原体山羊亚种(Mmc)、山羊支原体山羊亚种(Mcc)阳性血清产生交叉反应,检测阴性血清时存在背景值偏高的现象,这表明重组蛋白87.1可作为CCPP新诊断靶标,但其使用条件还需优化。引物92.1F/R在普通PCR中,Mccp M1801、Mccp zly-14、Mccp M1601、Mccp zly-1309F作为模板时可扩增出509 bp的目的条带,无乳支原体(Ma)PG2、Mmc PG3、Mmc(原MmmLC)YG、绵羊肺炎支原体(Mo)Y98、Mcc CKid、牛支原体(Mb)08M、李奇氏支原体(Ml)PG50作为模板时未扩增出条带,这表明序列92.1可作为CCPP新分子诊断靶标。在bELISA体系中,单抗7H11可检测出Mccp阳性血清,与Mmc、Mcc、Mo、Ma、Ml、Mb阳性血清无交叉反应,但是在检测Mccp人工感染山羊的后期血清时,出现假阴性结果,所以7H11是否可作为CCPP新诊断分子候选,还有待进一步评估。