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第一部分： SPOP在人胃癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系目的：探讨SPOP在人胃癌细胞系、人胃癌组织中的表达及临床意义。方法：免疫组织化学方法检测101例胃癌组织及相应癌旁组织的SPOP的表达，统计分析其与临床病理特征的关系；Western blot方法检测4例胃癌组织及癌旁组织的SPOP的表达；Western blot方法检测4株胃癌及1株永生化正常胃黏膜上皮细胞株细胞中的SPOP的表达。结果：1、101例胃癌组织中，88例癌组织中的SPOP的表达低于相应的癌旁组织，两者差异具有统计学意义（P <0.05）。SPOP在癌组织中的表达与淋巴结转移成正相关（r=0.225，P <0.05），与肿瘤分化程度（r=－0.232，P <0.05）及TNM分期（r=－0.375，P <0.01）成负相关，但与患者的年龄、性别均不相关；2、Western blot检测4例癌组织中SPOP表达均低于相应的癌旁组织；3、在人永生化胃粘膜上皮细胞系GES-1及四株胃癌细胞株AGS，SGC-7901，MKN-28，MKN-45中均有表达。结论：1、SPOP在胃癌组织中表达下调，与癌旁组织中的表达比较存在统计学差异（P <0.05）；2、SPOP表达与患者的淋巴结转移、肿瘤分化程度及TNM分期相关，但与患者性别、年龄均不相关。第二部分： SPOP基因表达质粒和SPOP-shRNA质粒构建及胃癌细胞模型的筛选与鉴定目的：为了进一步研究SPOP在胃癌中的作用机制，我们构建SPOP基因表达质粒SPOP-V5/His和干扰质粒SPOP-shRNA质粒，并构建SPOP高/低表达胃癌细胞模型。方法：1、通过基因克隆技术获得人SPOP基因cDNA序列，将其克隆，酶切，连接载体pUB6/V5-HisB，构建SPOP基因表达质粒SPOP-V5/His，并构建表达SPOP的胃癌稳转细胞系，利用免疫印迹法鉴定表达产物；2、针对人SPOP基因的pcDNATM6.2-GW/EmGFP载体构建SPOP-shRNA质粒，免疫印迹法鉴定表达产物，用脂质体转染技术转染MKN45细胞并流式细胞仪分选，构建低表达SPOP的胃癌细胞模型，利用免疫印迹法鉴定表达产物。结果：1、成功构建SPOP-V5/His表达质粒；2、以AGS为基础成功构建了稳转表达SPOP的胃癌细胞系模型；3、成功构建SPOP干扰质粒SPOP-shRNA，经Western blot鉴定显示SPOP-shRNA-1430的干扰效果最好；4、将SPOP-shRNA-1430转染到MKN-45胃癌细胞中，流式细胞仪分选，成功构建了低表达SPOP的胃癌细胞模型。结论：成功构建SPOP-V5/His表达质粒和SPOP-shRNA质粒，并构建SPOP基因过表达和低表达的胃癌细胞模型。第三部分： SPOP对胃癌细胞生物学行为的影响目的：研究SPOP对胃癌细胞生物学行为的影响。方法：利用本研究第二部分建立的SPOP表达质粒SPOP-V5/His构建过表达SPOP的胃癌细胞模型；利用SPOP干扰质粒SPOP-shRNA，构建低表达SPOP的胃癌细胞模型，采用MTT法检测、划痕实验、平板克隆形成实验，体外观察SPOP表达改变后，对胃癌细胞增殖、迁移、克隆形成等生物学行为的影响。结果：MTT法检测证实过表达SPOP抑制胃癌细胞AGS增殖能力，抑制SPOP表达后促进胃癌细胞MKN-45的增殖；划痕实验证实过表达SPOP能够降低AGS细胞的迁移能力，抑制SPOP表达后能够增强MKN-45细胞的迁移能力；克隆形成实验显示过表达SPOP抑制AGS细胞克隆形成，抑制SPOP表达后促进MKN-45细胞克隆形成。结论：SPOP具有抑制胃癌细胞增殖、迁移及克隆形成的作用，有可能成为胃癌治疗的新型候选靶点或诊断指标。第四部分： SPOP通过Hh/Gli信号通路影响胃癌细胞生物学行为的机制研究目的：研究SPOP对Hh/Gli信号通路的调控作用。方法：免疫共沉淀、免疫细胞化学实验检测SPOP与Gli2存在相互作用；建立SPOP表达质粒Myc-SPOP转染HEK-293T细胞株，检测其对Gli2的影响及对下游靶基因的影响； Dual Luciferase reporter试验检测SPOP对Hh/Gli信号通路的影响。结果：免疫共沉淀实验检测证实SPOP与Gli2存在相互作用；免疫细胞化学实验中激光共聚焦观察到Gli2表达与胞浆中SPOP表达呈负相关关系；增加SPOP的表达可降低Gli2的蛋白水平，但不影响其mRNA水平；增加SPOP的表达可促进促凋亡因子PARP及Caspase-3的增加；Dual Luciferase reporter试验证实增加SPOP的表达， Hh/Gli信号通路的活性逐渐降低，因此SPOP降低Hh/Gli信号通路的活性。结论：SPOP通过降低Gli2的蛋白水平，抑制Hh/Gli信号通路的活性，促进细胞凋亡，由此可能成为影响胃癌发生发展的主要机制。