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目的:观察葡萄籽原花青素提取物(grape seed proanthocyanidin extract,GSPE)对牛晶状体上皮细胞(bovine lens epithelial cells,BLECs) 增殖及细胞周期的影响,为后发性白内障的药物治疗提供新的研究方向。
方法:首先进行BLECs的原代及传代培养,取第2-3代的BLECs分别采用MTT法、流式细胞术及免疫组化SP染色法,研究不同浓度及作用时间的GSPE对体外培养的BLECs增殖及细胞周期的影响。
结果:GSPE能明显抑制BLECs的增殖,并呈现剂量和时间依赖性。在作用24h后,随着GSPE 浓度的增高(20μg/ml,60μg/ml,100μg/ml),A值逐渐变小(0.343±0.079,0.252±0.029,0.137±0.011),抑制作用逐渐增强(P<0.01)。100μg/mlGSPE 作用BLECs 24h,48h,72h 后,A值分别为0.137±0.011,0.096±0.025,0.055±0.008,差异有统计学意义(P<0.01)。流式细胞术结果显示:经过GSPE处理,BLECs的G0/G1期细胞数量增加,S期、G2/M期明显减少。100μg/mlGSPE作用24h后,G0/G1期细胞为83.67﹪±5.63﹪,阴性对照组为59.13﹪±5.71﹪(P<0.05)。免疫组化结果:GSPE剂量组中p21蛋白的表达增加,阳性细胞率从28.75[%]±1.25[%]增加到86.73[%]±5.11[%],与阴性对照组(7.73[%]±1.75[%])相比,差异有统计学意义(P<0.01)。
结论:GSPE通过上调p21蛋白的表达诱导细胞周期停滞于G0/G1期,能有效的抑制牛晶状体上皮细胞增殖,因此GSPE可能成为后发性白内障的药物治疗研究的新方向。