狂犬病（Rabies）是由狂犬病病毒（Rabies virus,RV）感染引起的一种致死性人畜共患传染病。该病呈全球性分布,亚洲尤其是我国流行较为严重,对人类生命安全构成严重威胁。疫苗免疫仍是预防和控制狂犬病的最可靠的手段,但由于常规疫苗普遍存在难以避免的安全隐患等问题,故研究和开发免疫效果好、成本低廉的新型狂犬病疫苗已成为研究热点。利用植物生物反应器生产动物疫苗是廉价高效疫苗的可靠来源之一,受到了科学家的普遍关注,特别是植物叶绿体表达系统由于具有外源基因表达量高、环境安全性好等优点,已成为目前植物生物反应器的研究热点,而莱茵衣藻由于具有培养方法简单、成本低廉且能大规模繁殖等特点,受到了科学家们的青睐。本研究将狂犬病免疫原性最好的糖蛋白和核蛋白基因转化到莱茵衣藻的叶绿体基因组中,经定点整合和表达后,初步获得了可以表达狂犬病病毒疫苗的转基因衣藻株系,为进一步利用衣藻生物反应器生产狂犬病毒疫苗打下了坚实的基础,主要结果如下:首先,将狂犬病病毒的糖蛋白和核蛋白的基因,即G基因和N基因,分别克隆到衣藻叶绿体表达载体中,构建了糖蛋白和核蛋白的衣藻叶绿体表达载体p64-G和p64-N。以衣藻叶绿体基因组clpP-trnL-petB-chlL-rpl23-rpl2为同源重组片段,壮观霉素抗性基因为选择标记,通过基因枪法转化衣藻叶绿体。在衣藻叶绿体中,表达载体p64-G和p64-N分别与叶绿体基因组发生同源重组作用,将目的基因及壮观霉素抗性基因定点插入到叶绿体基因组中,经壮观霉素筛选,获得抗性衣藻转化子。经PCR检测,证明目的基因已整合到衣藻叶绿体基因组中,对转化子进行4轮次的壮观霉素抗性筛选,以提高目的基因的同质化程度。根据同源片段的序列设计引物进行PCR扩增,对目的基因的同质化程度进行了检测,发现目的基因经过4轮的筛选均没有达到完全同质化,需要进一步的筛选。Western blot检测分析表明,糖蛋白和核蛋白在衣藻叶绿体中均获得表达。