【摘 要】
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该文采用RACE(RapidAmplificationofcDNAsEnds)和传统PCR相结合的方法,克隆了分属于三类的六个K通道神经毒素和一个Cl通道神经毒素的cDNA和genomic基因.为了研究BmP05的结构-
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该文采用RACE(RapidAmplificationofcDNAsEnds)和传统PCR相结合的方法,克隆了分属于三类的六个K<+>通道神经毒素和一个Cl<->通道神经毒素的cDNA和genomic基因.为了研究BmP05的结构-功能关系,采用相同的表达纯化体系得到了BmP05的七个突变体:K6A、Q9P、R13A、(K6A、R13A)、IGD22-24MNG、(K6A,R7A,R13A,IGD22-24MNG)和H31A.对这七个突变体进行了整体毒性测定和细胞K<+>电流阻断测定(包括Kv和SKca).实验结果表明:1、BmP05的α-螺旋中的碱性残基参与了BmP05和SKca的结合,并且3个残基的作用是互相协同的;2、α-螺旋结构对于BmP05的毒性相当重要;3、C端的H31对于BmP05和SKca的结合具有协同作用;4、α-螺旋中R13和连接两个β折叠的β转角对于BmP05特异识别SKcA具有重要作用.
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