芸香苷和丹参酮Ⅱ<,A>的分子印迹技术及毛细管电泳分离分析研究

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将分子印迹技术与高效毛细管电泳结合产生的分子印迹毛细管电色谱因兼具有分子印迹技术与高效毛细管电泳的双重优点,引起了分析工作者广泛的兴趣。本文在归纳总结了毛细管电色谱和分子印迹技术的基本原理以及分子印迹毛细管电色谱在分离分析中的应用基础上,针对芸香苷和丹参酮ⅡA的分子印迹毛细管电色谱柱的制备与应用还未见文献报道,研究了芸香苷和丹参酮ⅡA的分子印迹毛细管电色谱柱的制备及其应用前景。研究工作的具体内容如下:   1.制备了丹参酮ⅡA的分子印迹毛细管电色谱柱,并采用所制备的印迹毛细管和裸毛细管,分别建立了同时分离测定中药丹参及其制剂中丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA、隐丹参酮的分离分析方法。包括:   (1)利用毛细管区带电泳(CZE),建立了一个同时分离分析丹参及其制剂中丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA、隐丹参酮的分离分析方法。优化得到的电泳条件为:以含有25mmol/L,Na2B4O7、30mmol/L,β-环糊精和12.5%乙腈的缓冲体系(pH9.36)为电解质,分离电压采用17kV,柱温采用30℃,PDA检测器检测波长采用254nm,采用压力(0.5psi,3447.38Pa)进样5.0s,建立了一个在20min内同时分离丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA、隐丹参酮三种活性成分的CZE方法,并将该方法应用于丹参药材、复方丹参片、复方丹参滴丸、仙灵骨葆胶囊以及三十六味溶石胶囊中这三种活性成分的含量测定,结果令人满意。   (2)在研究了丹参酮ⅡA与MAA、AM、4-VP、2-VP相互作用的基础上,以丹参酮ⅡA为模板,丙烯酰胺(AM)为功能单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)为交联剂,甲醇为致孔剂,采用不同的模板、功能单体、交联剂的加入摩尔比,用原位聚合热引发方式制备了3根具有不同交联度的丹参酮ⅡA分子印迹毛细管电色谱整体柱。在优化了电色谱分离条件后,选用了以模板、功能单体、交联剂的加入摩尔比为1:4:15的印迹毛细管柱为分离通道,以含有25mmol/L,Na2B4O7、30mmol/Lβ-环糊精、10%乙腈的缓冲体系(pH9.36)为运行电解质,建立了一个在11min内同时分离测定了丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA和隐丹参酮三种活性成分的毛细管电色谱法,将其用于中药丹参中这三种丹参酮的测定,所得结果与CZE方法测定结果基本一致,而且与CZE相比,所建立的印迹毛细管电色谱法分析时间更短,分离效率更高。   2.以芸香苷为印迹分子,丙烯酰胺(AM)为功能单体,甲醇为致孔剂,乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)为交联剂,在热引发下原位聚合制备了芸香苷分子印迹整体毛细管柱,优化了分子印迹电色谱的分离条件。结果表明,以含有10mmol/LNa2B4O7和20%(v/v)乙腈的缓冲液(pH9.11)为运行电解质时,用该印迹毛细管可以在10min内同时分离和测定芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖(6→1)-α-L-鼠李糖苷、山奈素-3-O-β-D-葡萄糖(6→1)-β-D-葡萄糖苷、芸香苷、肥皂草苷和槲皮素这五种黄酮类物质,而且与同等条件下的毛细管区带电泳(CZE)相比,印迹毛细管电色谱方法的出峰时间虽然有所延长,但各组分之间的分离度明显提高,特别是在CZE中无法分离的山奈素-3-O-β-D-葡萄糖(6→1)-β-D-葡萄糖苷与芸香苷在印迹毛细管中得到了基线分离,说明此印迹毛细管整体柱产生了一定的识别分离能力。将采用所制备的芸香苷印迹毛细管建立的毛细管电色谱方法应用于植物银杏叶中相关组分的分离分析,得到了满意结果。样品中各组分的回收率均位于98.5%~103.2%之间,测定结果的相对标准偏差都小于5.0%。
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