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目的：为提高临床实验室造血干细胞计数结果的准确性和可比性,实验室需要开展室内质量控制,并参加室间质量评价活动。这些质量保证措施的实施均需要使用合格的造血干细胞计数全血质控物,但是目前国内尚无机构生产此类质控物,只能依靠国外生产商(如美国Beckman Coulter公司、美国BD公司等)生产的质控物。由于进口全血质控物价格昂贵,有效期短,入关手续繁琐,适用性欠佳等原因,限制了室内质量控制和室间质量评价活动的开展。为推动质量保证措施的实施,卫生部临床检验中心参考了大量国内外文献及专利,以新鲜人脐带血为原材料,研制了造血干细胞计数全血质控物,并对质控物的均匀性、稳定性及适用性等性能进行了评价。方法1.质控物的研制：通过实验对造血干细胞计数全血质控物制备过程中的影响因素进行研究,从而筛选质控物原材料,并优化制备方案。(1)通过实验对原材料自身稳定性进行观察,确定原材料筛选范围及处理时限,并调查获得可用于制备质控物的原材料的可行性。(2)选用14种的分离条件分离新鲜脐带血中的不同成分,并通过对分离条件的优化,提高分离方法的回收效率。(3)选用4种固定液对新鲜脐带血进行固定,并通过对固定液浓度的优化,改善固定效果。(4)根据上述实验结果,确定了最佳制备方案,进而制备了20111101和20111110两个批号的造血干细胞计数全血质控物,每批质控物各200支。2.质控物的评价(1)对红细胞裂解性能和白细胞散射特性进行了评价。(2)依据CNAS-GL03《能力验证样品均匀性和稳定性评价指南》及ISO Guide35《标准物质／标准样品的定值—通用原则和统计原理》的要求,对自制质控物CD34+细胞百分比指标的均匀性、稳定性进行评价,同时检测进口质控物作为对照。(3)选择2种主流机型流式细胞仪各4家实验室对自制质控物的适用性进行评价。(4)将自制质控物试用于Coulter-EPICS XL机型流式细胞仪室内质量控制。结果1.选用由北京市脐血库提供的新鲜脐带血做为质控物制备原材料。2.选用2号浓度的B固定液制备质控物。3.自制质控物的红细胞裂解性能评价结果显示,两个批号的质控物分别用两种常用溶血剂溶血后,流式上样管底无肉眼可见的红色沉积物；流式细胞仪白细胞散射图显示有核细胞分群清晰良好,无红细胞及细胞碎片干扰,白细胞散射特性保持完好。4.自制质控物均匀性评价结果显示,质控物样品内和样品间差异无统计学意义(P>0.05)；20111101、20111110批号质控物CD34+细胞百分比指标均匀性评价结果的变异系数(CV)分别为5.40%和6.12%；不确定度分别为0.004%和0.003%;20111208、20111222新鲜标本重复性测量的不确定度为0.010%和0.008%。5.自制质控物稳定性评价结果显示,20111101、20111110批号质拧物及进口质控物CD34+细胞百分比指标,8周内检测结果无线性趋势变化(P值均大于0.05)；20111101、20111110批号质控物和进口质控物8周内CD34+细胞百分比指标的百分偏差范围分别为-1.04%～5.05%、-1.35%～2.47%和-2.26%～1.50%;不确定度分别为0.023%、0.015%和0.012%。6.自制质控物在两种型号流式细胞仪上进行检测,白细胞分群清晰,CD34+细胞群与阴性细胞群分离明显。FS-1批号质控物CD34+细胞百分比指标在BD-FACSCalibur、Coulter-EPICS XL机型仪器间检测结果的变异范围分别为5.73%和4.53。FS-2批号质控物在BD-FACSCalibur、Coulter-EPICS XL机型仪器间检测结果的变异范围分别为6.72%和13.50%。7.室内质量控制试应用结果显示,20111101、20111110批号质控物和进口质控物在56天内的10次检测结果的CV分别为2.02%,1.24%和0.94%。结论：新鲜脐带血12小时内可保持稳定,且易采集,血量较大,故选用由北京市脐血库提供的可用于科学研究的新鲜脐带血作为质控物制备原材料。因新鲜脐带血制备的全血质控物与临床接收标本成分相似,所以能更好地模拟临床标本,评价实验室日常计数造血干细胞的能力。自制质控物的红细胞裂解性能良好,白细胞散射特性可保持完好,有核细胞分群清晰；均匀性评价结果良好,可认为自制质控物是均一的；稳定性评价结果显示自制质控物8周内可保持稳定,性能与进口质控物稳定性相似；使用BD-FACSCalibur、Coulter-EPICS XL机型各4台流式细胞仪检测自制质控物,检测结果组内CV小于10%,组间CV小于10%,图形结果白细胞分群清晰无交叉,CD34阳性细胞与阴性细胞群分离明显,适用性评价良好,可认为自制质控物适用于BD-FACSCalibur、Coulter-EPICS XL机型流式细胞仪；Coulter-EPICS XL流式细胞仪室内质控试应用结果显示,自制质控物CV小于5%,浓度水平相近的20111110批号自制质控物与进口质控物CV接近,室内质控试应用结果良好。综上所述,自制质控物可用于临床实验室的流式细胞仪造血干细胞计数质量控制。