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近年来谷物研究发现,小麦麸皮中富含有大量具有抗氧化活性的酚酸类物质,其通过酯键或醚键与麸皮上纤维素的阿拉伯糖或木糖交联在一起。在小麦麸皮中这种束缚型酚酸的含量远远超过游离型酚酸,这使得长久以来小麦麸皮中酚酸类成分的研究不受人重视,小麦麸皮的抗氧化活性受到低估。小麦麸皮中存在的多种抗氧化成分是其健康效应的基础,而其中酚酸类物质的含量与抗氧化活性具有很强的正相关性。且其含量可以达到小麦麸皮干重的1‰以上。但是这些酚酸类物质由于受限于其存在方式,只能在人体结肠微生物发酵的作用下才能发挥生物活性,使其抗氧化活性的生物利用度大大降低。因此,研究麦麸中大量束缚型酚酸的高效释放加工工艺,使得其在人体整个消化道内能充分发挥生物活性,对合理高效利用我国大量小麦麸皮资源,开发抗氧化食品添加剂,提高膳食质量,具有非常重要的意义。 本文着眼于小麦麸皮中酚酸类成分,建立了基于高效液相色谱法的麦麸中酚酸类成分的分析方法;对全国小麦主产区中不同品种小麦麸皮中酚酸类成分进行了筛查;研究确定了小麦麸皮中酚酸类成分的最优加工工艺;并且还对其中丰度最高的阿魏酸及其顺式异构体以及其他结构类似物进行了分离纯化工作。 首先,建立了一套可用于小麦麸皮中酚酸类成分的分析方法。小麦麸皮经过破碎处理后,按酚酸的存在方式不同,分为游离型酚酸FPA,碱解可溶共价结合型酚酸BHPA,酸解可溶共价结合型酚酸AHPA,碱解束缚型酚酸BBPA,酸解束缚型酚酸ABPA五个部分分别进行提取,使用高效液相色谱对8种酚酸类成分(4-羟基苯甲酸,4-羟基苯乙酸,丁香酸,4-羟基苯甲醛,香草酸,香豆酸,反式阿魏酸,肉桂酸)进行了检测,色谱条件如下:Phenomenex Luna5u Phenyl-Hexyl色谱柱,采用梯度洗脱,流动相:A为2%乙酸水溶液,B为甲醇;洗脱程序:0~25min,5%~30%B;25~35min,30%~50%B;35~45min,50%~100%B;45~55min,100%B;55~60min,100%~5% B;60~70min,5%B;柱温:30℃;进样量:10μL;检测波长280nm。并使用该方法对7种不同谷物的麸皮中的酚酸含量进行测定,结果表明,该方法测定结果重现性好,准确度高,适合用于小麦麸皮中酚酸类成分的分析检测。 其次,对全国三大小麦主产区(华北及黄淮产区,西北产区,西南产区)的15种小麦麸皮中酚酸类成分的含量进行了筛查,根据所得到的数据,分产区、分品种、分存在方式、分类型的对其中酚酸含量进行了分析对比。从产区来说,三大产区的顺序为华北及黄淮产区(2679.65μg/g麸皮~3537.90μg/g麸皮)>西北高原产区(1791.34μg/g麸皮~2461.45μg/g麸皮)>西南产区(1732.00μg/g麸皮~1906.17μg/g麸皮)。从小麦品种来说,冬小麦的酚酸含量总体上要高于春小麦,具有较好抗病性的小麦麸皮中酚酸类成分的含量较高,在较高海拔地区推广种植的小麦品种中,酚酸成分的含量相对要较少一些。从存在方式来说,碱解束缚型酚酸(BBPA)占到了小麦麸皮中酚酸含量的80%以上,是小麦麸皮中酚酸类物质存在的最主要方式,不同产区、不同品种的小麦在酚酸的存在方式上没有显著性差异。从酚酸类型上来说,反式阿魏酸占到总酚酸含量的40%以上;而在AHPA部分中,香草酸含量很大。且在抗旱性较好的小麦品种中,香草酸的含量更为明显。此外,其他各个类型的酚酸,平均分布,且含量均较低。 第三,针对麸皮中酚酸类成分的利用问题,本文着重研究化学法、生物法和物理法对小麦麸皮的组合加工工艺。经过单因素实验、单一方法优化、组合实验比较,得到现有条件下最优化的小麦麸皮酚酸成分的加工工艺为:首先采用化学碱解释放,取0.5mm粒径麦麸,用0.1mol/L的NaOH,料液比1∶40(m∶v),于60℃下碱解1h,调节pH值至中性,冷冻干燥;然后进行酶解处理,Ultraflo XL酶解,pH=5.6,料液比1∶20(m∶v),加酶量12%,35℃下酶解3h,冷冻干燥;最后均质化处理,用高压均质机进行20次的循环破碎成均一、稳定的颗粒,冷冻干燥后即得到具有高抗氧化活性和高游离酚酸含量的小麦麸皮深加工产物。与未经任何处理的小麦麸皮相比,其游离的总酚酸含量增加了11.3倍,达到4873μg/g麸皮,抗氧化系数也增加3.2倍。 第四,本文成功的运用了常规高速逆流色谱(正己烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶水=2∶5∶2∶4)与pH-区带精制逆流色谱(正己烷∶乙酸乙酯∶乙腈∶水=2∶5∶2∶2)相结合的方式,对小麦麸皮中含量最高的酚酸类抗氧化活性成分——阿魏酸进行了分离纯化。并且利用pH与物质极性的双选择性,实现了顺式阿魏酸与反式阿魏酸的制备性拆分。得到了包括顺反式阿魏酸异构体在内的4个高纯度单体组分。分别为:p-香豆酸(纯度91.00%),肉桂酸(纯度95.62%),顺式阿魏酸(纯度98.49),反式阿魏酸(纯度99.46%)。