桔青霉发酵产生的核酸酶P1(Nuclease P1)是一种具有重要应用价值的酶制剂。大规模生产5-核苷酸是核酸酶P1的主要用途，而5-核苷酸在分子生物学中的用途颇广，并且可广泛应用于食品工业和生化制药工业。所以，筛选高产核酸酶P1的菌种显得尤为重要。而Genome shuffling技术不仅避开了对复杂代谢网络的认识和所希望表型决定基因的确定，还大大地提高了多基因控制表型菌种改良的可操作性。　　 因此本论文采用Genome shuffling选育核酸酶P1高产菌株，通过小室培养和RAPD图谱观察分析了融合子与出发菌株的形态差异以及高产菌株间的遗传相似性，最后分离纯化得到单一核酸酶P1。　　 以实验室诱变筛选的6株桔青霉作为出发菌株，经过6轮原生质体融合，从362株融合子中筛选得到3株高产菌株。其中第6轮融合菌株G-16的酶活达到1762.49U/mL，其活力比出发菌种A-1(420.22U/mL)提高了3.2倍。　　 采用三点接种法和U型管小室培养法从形态学上对原始菌株4011和高产菌株G-16的菌落形态、菌丝和分生孢子进行比较。发现与4011(菌落呈绿色)不同的是：在PDA培养基上，G-16菌落呈灰白色，在CYA培养基上则呈白色。显微镜下看到G-16的菌丝浓密并且相互环绕交织，形成完整的扫帚状分生孢子头(4011分生孢子头几乎都不够完整)，其分生孢子串也较4011多。　　 接着从分子的角度进一步了解突变株DNA的遗传多态性，筛选6条随机引物分别对3株高产菌株、3株低产菌株及原始菌株4011进行RAPD扩增，共扩增出30条RAPD条带，其中25条为多态性条带，多态检出率为83％。G-16与同样是高产菌株的F-71遗传相似系数最大(0.77)，遗传距离最小(0.185)；与低产菌株E-9的遗传相似系数最小(0.58)，遗传距离最大(0.462)。　　 为了对高产菌株的发酵性能有深入的了解，把G-16和F-71在5L发酵罐中进行了产酶扩大试验。F-71接种20h后菌丝体进入快速生长期，但酶活非常低，直到85h之后酶活开始平稳上升。而G-16的菌丝体以相对恒定的速度生长，发酵前42h几乎没有酶活，之后酶活急剧上升至83.6h酶活最高达到1980.22U/mL后略微下降，121.5h酶活降为1886.34U/mL。　　 最后，建立了一条核酸酶P1分离纯化的技术路线。通过运用硫酸铵分级沉淀、超滤浓缩以及离子柱纯化等生化分离手段，提纯得到核酸酶P1(酶比活5436.5U/mg，纯化倍数5.52)。SDS-PAGE和电泳实验同时验证其为高纯度的核酸酶P1活性蛋白，蛋白分子量约46KDa。