Itol A抑制草地贪夜蛾生长发育的作用机理研究

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Itol A是从大风子科(Flacourtiaceae)植物伊桐(Itola orirntalis Hemsl)中分离到的结构新颖的isoryanodane型二萜类化合物,其对鳞翅目夜蛾科(Lepidoptera:Noctuidae)昆虫草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)具有显著的生长发育抑制活性。本论文以itol A对草地贪夜蛾生长发育的影响为出发点,研究了itol A对草地贪夜蛾保幼激素(Juvenile hormone,JH)信号通路的影响,初步揭示了itol A抑制草地贪夜蛾生长发育的作用机理,并对其作用模式进行了预测。主要研究内容及结果如下:(1)转录组测序结果表明:亚致死浓度(500 mg/L)下的itol A显著影响了草地贪夜蛾幼虫体内不同基因的表达,测序数据共注释到1531个DEGs,其中514个上调,1017个下调;注释到与JH相关的DEGs 126个,其中51个上调,66个下调;参与JH合成与代谢途径的ALDH、JHE、JHBP等基因均显著下调,JHBP的表达丰度最高,表达差异最为显著。(2)注射ds JHBP显著沉默了草地贪夜蛾幼虫Sf JHBP基因的表达,24 h的沉默效率为74.8%;沉默Sf JHBP后在一定程度上可以缓解itol A对草地贪夜蛾幼虫生长发育的抑制作用,注射ds JHBP之后再用itol A处理草地贪夜蛾幼虫,其幼虫的生长发育表征与itol A单独处理组之间存在着显著差异,itol A处理组延长其幼虫期11 d,而itol A+ds JHBP处理组仅延长其幼虫期6 d。此外,itol A处理组的羽化率仅为对照组的29.67%,而itol A+ds JHBP处理组的羽化率则是对照组的51.0%。结果表明,itol A影响了Sf JHBP的功能。(3)PRM蛋白定量共检测到14个质量较好的肽段,其中JHBP检测到3个肽段,RPL、APLP和ARY分别检测到1个、3个和1个肽段。表达丰度最高的JHBP蛋白经itol A处理后表达量显著降低,与JH-JHBP转运相关的,表达丰度较低的血淋巴蛋白(APLP、ARY)表达量也有所下降但不显著。(4)Itol A作用草地贪夜蛾幼虫后显著降低其体内的JH含量,且具有浓度和龄期效应。Itol A处理3 d后,250 mg/L浓度下幼虫的JH含量降低了30.59%,500 mg/L浓度下JH的含量降低了36.59%;500 mg/L浓度下4龄幼虫的JH含量降低了24.03%,5龄幼虫的JH含量降低了39.56%。(5)Itol A亚致死浓度下显著下调草地贪夜蛾幼虫JH合成途径关键酶基因(Sf JHAMT、Sf FPPS)的表达,上调其代谢途径关键酶基因(Sf JHE、Sf JHEH、Sf JHDK)的表达。研究结果表明:JHBP可能不是itol A唯一的响应元件,但itol A在一定程度上作用于JHBP,itol A可能主要通过作用于JHBP从而阻碍JH转运,扰乱其体内JH水平进而影响其合成与代谢基因的表达,最终导致草地贪夜蛾生长发育受阻。研究结果初步揭示了itol A抑制草地贪夜蛾生长发育的作用机理,阐明了JHBP作为农药创制潜在靶标的可能性,同时为开发利用itol A作为先导结构提供理论依据。
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