疫苗佐剂能够选择性的刺激免疫应答而提高免疫效果。铝盐作为疫苗佐剂已有近80年的历史。商业疫苗中的铝佐剂包括偏氢氧化铝(结晶型的AlOOH，即通常所说的氢氧化铝)和磷酸氢氧化铝(Al(OH)x(PO4)y，即通常所说的磷酸铝)。氢氧化铝佐剂由于高吸附能力及其对某些抗原具有较好的吸附性而优于磷酸铝佐剂，它也是唯一被美国FDA认证的人用疫苗佐剂，其等电点iep(isoelectric point，iep)=11.4，在机体pH=7.4的间质液中带正电荷。虽然氢氧化铝佐剂应用历史悠久，但其具体作用机制不明，目前认为主要是“储存库效应”和“免疫刺激效应”两种机制。铝佐剂吸附抗原后，在接种区域形成抗原贮存库，一方面在该处强烈吸引树突状细胞(DC)、巨噬细胞(Mφ)等抗原提呈细胞(APC)识别与内吞：另一方面，在注射局部缓慢释放抗原，延长了APC与T淋巴细胞相互作用的时间，从而提高抗体应答，增强体液免疫。 氢氧化铝佐剂吸附抗原，主要依赖于抗原的物理化学特性，其他吸附条件，包括pH值、温度、胶粒粒径以及反应混合物的离子强度等，影响着氢氧化铝的吸附度。在制备过程中，这些条件常常被忽略并且很少阐明，从而影响了佐剂最佳效应的发挥。有关胶粒粒径影响其吸附能力的研究表明：相对于较大颗粒而言，较小颗粒具有更大的表面积，从而可吸附更多的抗原。例如，氢氧化铝佐剂吸附白喉内毒素的量，与其粒径成反比。 我们选择HBsAg作为铝佐剂吸附的模式抗原，主要考虑如下：HBsAg是由蛋白质、糖和脂质构成的复杂的大分子聚集物，其分子量为3500kDa，脂质中的磷脂约占70％：HBsAg与氢氧化铝的吸附不是由疏水作用、电荷吸引，而主要是HBsAg的磷酸根与氢氧化铝佐剂的氢氧根，这两个配基之间的交换，提供了最强的吸附机制；并且体内与体外的吸附度变化不大，所受到的解吸附作用及其微小。所以，当氢氧化铝佐剂成为纳米级颗粒吸附HBsAg时，主要与急剧增大的比表面积有关。又由于纳米粒子具有表面反应活性高、表面活性中心多、吸附能力强等这些优异性质，从而对吸附度有较大的影响，会吸附更多的HBsAg。 纳米粒子与生物体有着密切的关系，并且纳米佐剂可以避免载体效应的发生，还是巨噬细胞、树突状细胞的首选吞噬目标。正是基于纳米粒子不同于常规粒子的特性，第三军医大学硕士学位论文我们采用w/O型微乳液制备纳米铝佐剂，并初步评价了其辅佐HBsAg的疫苗佐剂的生物学行为。首先，我们考察了阳离子表面活性剂(苯扎澳钱)和助表面活性剂(正辛醇)的最大饱和溶水量，即二者最佳复配的质量比为l:l，略大于理论值5二8，与理论值较为符合;然后讨论了最佳复配比的混合表面活性剂与油(环己烷)和Alcl3溶液形成微乳液体系的相行为，并绘制了拟三元相图，W/O型微乳液区在拟三元相图的底部。恒温下，该区域的各组分比例即为制备纳米铝佐剂的微乳液配方。在保证产品为纳米级的前提下，同时考虑生产成本，当油相一定时，溶水量越多则产量越多，在此条件下，确定适合作为制备反应相的W/0型微乳液的配方，制备了纳米铝佐剂。产物透射电镜(TEM)照片分析:颗粒为平均粒径72.62nm的球形颗粒，形状较规则、分布均匀。X射线衍射(XRD)进一步分析，XRD图谱中峰尖的特征值主要为4.7262，4.3710，3.2019，2.2213，1.7215，1.4577，1.3317。与JCPDS卡对照，可确定本方法制备的产品为AI(OH)3。差式量热扫描(DSc)分析的相变温度，较常规Al(O琦3颗粒的转变温度有较大的提前，主要是颗粒粒径较小的缘故，间接证明了制备产物为纳米级。 为了研究纳米铝佐剂的生物学效应，我们采用未加佐剂的HBsAg为抗原，采用ELisA狈四定了纳米铝佐剂对疫苗的吸附能力，前者上清OD45。值约为常规铝佐剂的10倍。 从免疫学观点来看，最关心的是纳米氢氧化铝佐剂能否提高其对病毒抗原的免疫应答以及对抗病毒的保护水平。我们进一步研究了纳米铝佐剂物理吸附HBsAg后的动物免疫效果。 按lmg铝佐剂吸附IOpgHBsAg的标准，配制新型的乙肝疫苗。以常规铝佐剂为对照，皮下注射豚鼠，ELISA法检测血清中抗体水平以测定体液免疫应答。纳米铝佐剂在初次免疫后的第1周和第2周可以产生抗一HBs抗体，其GMT分别为22.974士1 .3612和26.389士1.4214，而常规铝佐剂组为2士0.073和13.195士1.1204。提示:纳米铝佐剂可以较早的刺激抗一HBs抗体的产生。其机制可能是初次免疫后的爆释效应伪urst一released)所致;但其作用时间有限，而“免疫刺激效应”是其随后的作用机制，二者在作用时间上存在着先后关系。可能正是由于该原因，纳米铝佐剂的爆释效应快速作用并消失后，而免疫刺激效应又未即时完全起效，导致本研究中观察到第3周的抗体滴度略有下降，而其余时间的抗体滴度相同。 Balb/c小鼠双侧腹股沟皮下注射，经l次或3次免疫后，测定细胞免疫应答的指标，具体包括: 3H一TdR掺入法测定小鼠脾淋巴细胞增殖能力，无论是采用皮下注射的一次免疫程第三军医大学硕士学位论文序，还是皮下和腹腔注射的三次免疫程序，纳米铝佐剂组对小鼠脾淋巴细胞的刺激作用，均强于常规铝佐剂组，但二者无显著性差异。这与既往的分?