靶向OPN的miRNA对人肺腺癌细胞株A549顺铂敏感性的影响

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目的:利用体外构建的表达质粒瞬时转染人肺腺癌细胞株A549细胞,探讨miRNA介导的RNAi沉默骨桥蛋白(OPN)基因表达对A549顺铂(DDP)敏感性的影响。方法:1.靶向OPN的miRNA表达质粒瞬时转染A549细胞,酶联免疫吸咐法(ELISA)检测转染后48 h细胞的OPN蛋白表达水平。2.转染后24、48、72、96 h,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法分别检测转染细胞和转染联合5μg/ml顺铂作用后细胞的增殖。3.转染后24 h联合不同浓度的顺铂作用48 h,MTT法检测细胞增殖抑制率。结果:1.转染后48 h,OPN蛋白表达水平下调了47.34%(p<0.01)。2.转染后24 h细胞增殖开始受抑制(p<0.05 ),48、72、96 h细胞增殖被明显抑制,细胞增殖活性分别为1.36±0.11,1.54±0.13,1.71±0.14,差异均有统计学意义(p<0.01)。转染联合顺铂(5μg/ml)作用24 h细胞增殖开始受抑(p<0.05),48、72、96 h细胞增殖明显受抑,细胞增殖活性分别为0.41±0.03,0.29±0.01,0.18±0.01,与未转染组及非特异性转染组差异均有统计学意义(p<0.01)。3.转染后24 h联合不同浓度的顺铂作用48 h,当顺铂浓度为2.5、5、10、20μg/ml时,细胞增殖被明显抑制,细胞增殖抑制率分别为(60.87±0.07)%、(77.72±0.06)%、(85.87±0.08)%、(92.39±0.06)%,差异均有统计学意义(p<0.01)。结论:靶向OPN的miRNA可以有效抑制人肺腺癌细胞A549增殖,增强A549细胞对顺铂的敏感性。
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