萝卜游离小孢子培养与同源四倍体创制研究

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萝卜(Raphanus sativus L.)为十字花科萝卜属中能形成肉质根的一、二年生草本植物,是我国重要的蔬菜作物之一,具有较高的食用价值和经济价值。萝卜小孢子培养和同源四倍体的诱导是萝卜种质创新的两种重要途径,但是目前萝卜小孢子培养受基因型限制严重,高效的胚状体诱导和植株再生体系尚未建立,而且萝卜同源四倍体的诱导和鉴定体系也不完善。本试验在萝卜小孢子培养研究中,选用不同萝卜品种为试材,研究影响小孢子培养和植株再生的因素;在四倍体诱导研究中,尝试采用DMSO辅助秋水仙素诱导萝卜同源四倍体,并比较二倍体和四倍体萝卜的特征特性差异,以期进一步完善萝卜小孢子培养体系,提高同源四倍体萝卜诱导率,为萝卜品种的改良提供新种质,并为小孢子培养和同源四倍体诱导提供技术支撑。萝卜游离小孢子培养研究方面,共得到了14个具有成胚能力的基因型,不同基因型之间成胚率有显著差异;通过小孢子不同发育时期的荧光观察发现花蕾长度处于2.5-3.5 mm时小孢子处于单核靠边期的比例最高;培养基中添加1-2 mg/L的硝酸银或0.05 mg/L的6-BA能提高某些基因型小孢子的胚状体产量;培养基中添加0.1g/L活性炭可有效提高胚状体质量,减少畸形胚比例;子叶胚在添加0.2mg/L的6-BA和0.02mg/L的NAA的MS-3培养基中可直接成苗,对于不能直接成苗的子叶胚可以在培养基MS-3+4 mg/LAgNO3+0.2 mg/LTDZ+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA上通过诱导愈伤组织分化形成次生胚,进而发育成苗;最适宜的生根培养基类型为B5+0.1 mg/LNAA。在诱导同源四倍体萝卜的试验中,Nau-dqt, Nau-qtbjq与Nau-dy13得到了四倍体植株,品种Nau-qtbjq获得四倍体诱导率最高,同时0.1%秋水仙素和0.2%的二甲基亚砜处理3个品种得到的四倍体诱导率都是最高;四倍体萝卜与二倍体萝卜相比,幼苗期生长缓慢,真叶期叶片皱缩,花期晚;3个品种的四倍体植株花瓣横径增长,花粉粒变大,保卫细胞内叶绿体数目增多,气孔密度降低,且差异显著;四倍体萝卜花粉母细胞在减数分裂前期Ⅰ出现双核仁,中期Ⅰ和Ⅱ有染色体游离于赤道板外,后期Ⅰ有落后染色体,并在后期Ⅱ出现不均等分裂等现象,推测减数分裂中染色体的异常行为可能是导致四倍体萝卜花粉萌发率较低的细胞学原因。
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