背景:随着医疗技术的进步，许多组织、器官缺血后能在短时间内重新获得血流灌注。然而有时这种血流再灌注却加重器官的功能障碍和结构损伤，此现象称为缺血再灌注损伤(IRI)。肾是富血流的器官，对IRI相当敏感。IRI是缺血性急性肾功能衰竭(ARF)的重要发病机制，在肾移植过程中，它是导致早期移植肾功能障碍，甚至急性排斥反应的重要因素。尽管近年来治疗技术有了一定的发展，ARF仍然有较高的发病率和死亡率。因此，研究肾IRI的发病机制，寻求新的针对IRI本身的防治方法具有重要意义。近年来研究证实，肾IRI是一个多因素、多途径参与的复杂病理生理过程：肾组织经历缺氧再复氧的打击后，通过氧自由基的损伤作用、细胞内钙超载、炎症因子浸润等途径，导致毛细血管通透性增加、肾间质水肿以及急性肾小管坏死。因此有效的治疗IRI的方法应从多方面来阻断这种病理生理过程。参附注射液(SF)的主要有效成分为人参皂甙，临床上已应用于治疗心、脑、肠的缺血再灌注损伤。它可通过清除氧自由基、拮抗细胞内钙超载、抑制炎症细胞浸润等机制减轻IRI，保护脏器功能。目前对于参附注射液在肾IRI中的改善作用和机制的研究较少，其在肾脏作用的靶点和效应尚待进一步研究。 目的:采用人近端肾小管上皮细胞系HK-2细胞建立肾急性缺血再灌注损伤的体外模型，结合本实验室已完成的动物实验，进一步在细胞、分子水平探讨参附注射液在肾IRI的改善作用及其机制，从而为参附注射液在肾脏病领域的广泛应用提供实验依据。 方法:实验分5组：正常对照组、单纯缺氧再复氧组(IRI)、低浓度参附(1％)+IRI组、中浓度参附(2％)+IRI组、高浓度参附(5％)+IRI组。体外培养HK-2细胞，以双气道孵箱营造含1％O2、5％CO2的缺氧环境，细胞放回常规孵箱为复氧。观察各组细胞在缺氧4h再复氧8h刺激下的反应。 1.用流式细胞仪PI染色法和TUNEL检测细胞凋亡比例； 2.用激光共聚焦显微镜检测经Fluo-3AM标记的细胞内钙浓度； 3.用ELISA检测细胞培养液中MCP-1的浓度。 结果: 1.SF减少细胞在缺氧再复氧刺激后的凋亡率，并呈剂量依赖性，5％SF组凋亡率最低，并与单纯IRI组有显著差异。流式细胞术与TUNEL法检测的凋亡率一致。 2.SF抑制缺氧再复氧刺激后的细胞内钙超载，并呈剂量依赖性，5％SF组细胞内钙荧光值最低，与单纯IRI组相比有显著差异。 3.HK-2细胞正常情况下分泌少量的MCP-1，在缺氧再复氧刺激下分泌量增加。SF有抑制肾小管上皮细胞分泌MCP-1的作用，但未观察到剂量依赖性。 结论:参附注射液通过以下机制发挥改善肾缺血再灌注损伤的作用： 1.参附注射液可以降低缺氧再复氧诱导的肾小管上皮细胞的凋亡率。 2.参附注射液可抑制缺氧再复氧诱导的肾小管上皮细胞内钙超载。 3.参附注射液可抑制肾小管上皮细胞在缺氧再复氧诱导下分泌MCP-1。