目的:食管鳞癌（ESCC）是食管癌最常见的组织学亚型,被认为是世界上最致命的癌症之一。中国是ESCC的高发病地区,尽管在诊断和治疗方面取得了进展,ESCC的预后仍然很差。因此,仍需进一步阐明这种疾病的分子机制,探索更安全有效的治疗靶点,改善ESCC患者的预后。既往研究显示Wnt2在多种恶性肿瘤中高表达,却在成人重要器官中几乎不表达,这提示是Wnt2是一个潜在的肿瘤治疗靶点。我们课题组前期研究发现Wnt2在ESCC组织中高表达,由FGFR2阳性的肿瘤相关成纤维细胞（CAF）分泌,通过旁分泌作用ESCC细胞激活Wnt/β-catenin信号通路促进ESCC的生长,侵袭和转移。而多项研究表明Wnt2是一种促血管因子,参与生理和病理血管生成的调控,因此我们推测Wnt2参与调控ESCC的血管生成。本课题的目的是探究Wnt2对ESCC血管生成的影响,并初步分析其作用机制。方法:1.采用MTT法检测Wnt2对体外人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）增殖的影响。2.采用Transwell法检测Wnt2对体外HUVECs迁移的影响。3.采用小管形成实验法（tube formation assay）检测Wnt2对体外HUVECs成管能力的影响。4.用人ESCC细胞系KYSE180建立ESCC裸鼠皮下移植瘤模型,然后用Wnt2抗体进行治疗。通过测量肿瘤体积变化,检测Wnt2抗体对体内ESCC生长的影响。用免疫组织化学技术检测肿瘤组织中CD31的表达,分析瘤体的微血管密度,检测Wnt2抗体对体内ESCC血管生成的影响。5.采用RT-RCR检测WNT2在HUVECs上的基因表达情况。6.采用Western blot检测在不同的Wnt2处理时间条件下HUVECs中VEGFR2、CD31、Snail、Vimentin和N-cadherin的表达。7.用基因表达谱交互分析网站GEPIA分析WNT2与血管生成相关基因在人食管鳞癌中的相关性,筛选出与WNT2基因相关度比较高的基因以待验证。8.用RT-RCR检测筛选出来的候选基因在不同Wnt2处理时间条件下在HUVEC中的基因表达情况。9.采用Western blot检测经PCR验证过的候选基因与β-catenin和p-β-catenin在不同Wnt2处理时间条件下在HUVEC中的蛋白表达。结果:1.Wnt2连续处理HUVECs 5天,其增殖能力没有明显变化。2.Wnt2蛋白处理组迁移的HUVECs数量明显比对照组多,用Wnt2抗体中和Wnt2蛋白后,HUVECs迁移的数量又基本回落到对照组水平。3.Wnt2处理组的HUVECs形成的网眼数,分支数和小管的总长度明显均比对照组的多。4.与对照组相比,Wnt2抗体治疗组的ESCC肿瘤体积相对较小,肿瘤微血管密度减少。5.Wnt2在HUVECs上不表达。6.Wnt2处理HUVECs2h,Wnt2处理组的Snail的蛋白表达水平明显升高,Vimentin和N-cadherin的表达也略有升高,用Wnt2抗体中和掉Wnt2蛋白后,这三种蛋白的表达表达都基本回调至对照组的水平。Wnt2处理HUVECs 5h,Wnt2处理组的N-cadherin的表达明显升高,而Snail和Vimentin的表达没有影响,用Wnt2抗体中和掉Wnt2蛋白后,N-cadherin的表达有所回调。而内皮细胞标志物VEGFR2和CD31的表达不受Wnt2的影响。7.筛选出的与WNT2基因相关度比较高的血管生成相关基因分别是TIMP1、TIMP2和CCL2。8.PCR结果显示从Wnt2处理HUVECs 4小时开始,TIMP1和TIMP2的基因表达升高,而CCL2基因表达不受影响。9.Wnt2处理HUVECs 5小时,与对照组相比,TIMP1的蛋白表达明显升高;而用Wnt2抗体中和掉Wnt2蛋白后,HUVECs中TIMP1的蛋白表达相较于Wnt2蛋白处理组明显下降,基本回落至对照组水平。但是β-catenin和p-β-catenin的表达不受Wnt2的影响。结论:1.Wnt2在HUVECs上不表达。2.Wnt2不影响HUVECs的增殖,但是促进HUVECs的迁移和小管形成能力。3.靶向Wnt2的抗体治疗抑制体内ESCC的生长和血管生成。4.Wnt2通过促进内皮间质转化来增强HUVECs的的迁移能力。5.Wnt2不依赖于Wnt/β-catenin信号通路促进HUVECs中TIMP1的表达。