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肉毒碱又称肉碱、卡尼汀或维生素BT,是体内一种不可缺少的生化活性成分。在脂肪酸的β-氧化供能过程中,肉毒碱转运活化长链脂肪酸进入线粒体内进行代谢。肉毒碱在脂肪酸代谢过程中具有重要作用,本课题旨在通过实验动物兔研究肉毒碱对高脂血症的作用,并探讨了血清中肉毒碱水平与血脂的相关性。
本研究首先建立了兔血清中游离肉毒碱测定的高效液相色谱方法。在所建立的分析条件下,肉毒碱与衍生剂对溴苯乙酰基溴反应产生的衍生酯的色谱保留时间适中,峰形清晰对称,与样品中其余内源性物质分离完全,定量准确,衍生化反应产物在100min内测定稳定(RSD=2.71%).肉毒碱在0~200μmol/L,浓度范围线性良好,其线性回归方程和相关系数分别为y=908.31x+1009.6,r2=0.9998。样品测定批间(n=7)及平均批内(n=5)测定的相对标准偏差分别为3.04%和2.04%,平均测定回收率为96.97%.本方法较为简便、准确,为进一步开展肉毒碱对高脂血症影响的动物实验研究奠定了方法学基础.
动物实验研究首先探讨了每天每千克体重补充200mgL-肉毒碱对高脂饲料喂养兔血脂及血清游离肉毒碱的影响。结果显示,补充肉毒碱能够显著提高兔血清游离肉毒碱水平,并抑制血清胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白B的升高,但对于高密度脂蛋白影响较小.在此基础上,研究了对高脂血症兔补充不同剂量肉毒碱后血脂以及血清游离肉毒碱水平的变化规律。结果表明,补充肉毒碱对高脂血症兔体重无影响,能够降低血清胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇和载脂蛋白B水平,并提高高密度脂蛋白胆固醇和血清游离肉毒碱水平。补充高剂量肉毒碱对血清游离肉毒碱水平的提高和改善血脂的作用更加明显,但随着时间的延长,补充不同剂量肉毒碱对血清游离肉毒碱和血脂的作用差异逐渐减小.
在动物血清肉毒碱测定方法的基础上,建立了人血清中游离肉毒碱,总肉毒碱以及酯酰化肉毒碱的测定方法.结果显示在建立的方法下,游离及总肉毒碱能够准确定量,在0μmol/L-400 μmol/L浓度范围线性良好.血清中游离肉毒碱和总肉毒碱批间(n=7)及平均批内(n=5)测定的相对标准偏差分别为1.77%、1.97%和3.04%、3.36%,测定回收率分别为98.2%和96.3%.
应用血清肉毒碱测定方法,本研究测定了南京地区成年体检人群的血清肉毒碱水平,分析了肉毒碱水平与年龄及性别的相关性.结果显示,347名成年体检人群血清中肉毒碱水平测定结果为:男(182名):总肉毒碱(52.20±8.59)μmol/L,游离肉毒碱(42.33±8.27)μmol/L,酯酰肉毒碱(9.87±2.93)μmol/L;女(165名):总肉毒碱(48.21±9.91)μmol/L,游离肉毒碱(37.88±8.69)μmol/L,酯酰肉毒碱(10.33±3.50)μmol/L。统计学分析显示,男性血清中游离肉毒碱及总肉毒碱水平与女性组相比明显偏高,差异具有统计学意义(P<0.01)。两组间酯酰肉毒碱浓度差异无统计学意义(P>0.05)。年龄段分析结果显示,20~50岁之间,女性血清游离及总肉毒碱水平显著性低于男性(P<0.05),并随着年龄的增大而逐渐升高,50岁以后差异无统计学意义(P>0.05)。酯酰化肉毒碱浓度在性别和各年龄段则无显著变化。
本研究还探讨了2型糖尿病病人血清肉毒碱水平与正常体检人群肉毒碱水平差异及其与血脂的相关性.结果显示,2型糖尿病病人血清中游离及总肉毒碱水平低于正常体检人群,游离肉毒碱水平及总肉毒碱水平与总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白B及血糖水平呈负相关关系,而与高密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白Al水平呈正相关关系.酯酰化肉毒碱水平与血脂、血糖水平无相关性。提示2型糖尿病病人中可能存在游离肉毒碱的缺乏并引起血脂代谢异常,补充肉毒碱有助于改善2型糖尿病病人血脂代谢作用。