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人血浆中的高丰度蛋白,有很强的遮盖作用,影响血浆中一些低丰度蛋白(ng/mL或pg/mL)的检出,而这些被遮盖的低丰度蛋白很可能是信号传导和调控的关键蛋白或某些重大疾病的关键指示分子,对疾病的早期诊断和疗效检测具有重要意义。因此建立特异地去除血浆高丰度蛋白的方法,提高血浆中低丰度蛋白检测的灵敏度具有重要的意义。目的:研究针对人血浆中部分高丰度蛋白的特异性鸡卵黄抗体的制备方法和条件,及其对人血浆高丰度蛋白去除的方法及条件,为血浆蛋白组学前期研究提供技术参考。方法:用HSA、IgG以及混合成分和人全血浆分别作免疫原免疫产蛋前(100 d)Roman母鸡和产蛋后(150 d)Roman母鸡;以间接ELISA法和免疫扩散法检测其免疫后的血清效价。采用水溶解法、饱和硫酸铵梯度沉淀及阴离子交换柱分离制备出抗HSA、IgG和抗人全血浆鸡卵黄抗体IgY,并将其偶联于金磁微粒载体上,进行血浆高丰度蛋白去除研究。结果:产蛋前被免疫的鸡,免疫60～150d,血清抗体效价可达1:10 000～1:25 000;建立了IgY提取工艺路线:卵黄液与去离子水(体积比1:9,pH=5.2左右)混合4℃搅拌9 h,离心。上清过滤,两次饱和硫酸铵分别沉淀至终浓度30%、19%,离心、透析后经DEAE-fast-flow阴离子交换柱纯化。其IgY抗体纯度达98%以上。以金磁微粒载体固定的IgY,可对血浆中的HSA,IgG进行特异性的去除、抗人全血浆IgY对人全血浆中的高分子量(＞83K)蛋白可有效地去除;免疫电泳分析,抗人全血浆IgY至少对人血浆中4种蛋白成分产生免疫特异性。结论:人血浆中的高丰度蛋白成分HSA、IgG及人全血浆免疫产蛋母鸡后,可从鸡卵黄中分离提取到高效价、高纯度的卵黄抗体IgY;可特异性的去除人血浆中部分高丰度蛋白,为血浆蛋白质组学研究提供了一种新方法,有较好的应用前景。