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乙型脑炎是由乙型脑炎病毒(JEV)感染所引起的一种危害严重的虫媒性人畜共患病。该病毒主要经过扩增宿主猪和媒介昆虫蚊子进行传播。猪是其主要的扩增宿主和传染源。感染后可引起母猪流产、死胎、木乃伊胎及公猪发生睾丸炎,不仅给养猪业造成巨大经济损失,而且还严重威胁着人类健康。临床准确诊断是有效防控该病的重要途径。但由于传统的病毒分离鉴定方法操作复杂、难度大、周期长,而RT-PCR等分子生物学方法虽然敏感,但操作技术要求高、需要特殊仪器设备、且易出现假阳性,因此,简便、准确、快速的抗原检测方法显得尤为迫切。本研究利用乙型脑炎病毒单克隆抗体和多克隆抗体,建立了可用于检测猪、人和蚊子等多种临床样品中乙型脑炎抗原的双抗体夹心ELISA方法,并制备了试剂盒,为乙型脑炎的临床快速诊断提供了有效工具。具体研究内容如下：1.JEV双抗体夹心ELISA抗原检测方法的建立本研究制备了兔源乙型脑炎病毒多克隆抗体。在此基础上,以已经获得的JEV E蛋白单克隆抗体作为一抗包被酶标板,兔源JEV多克隆抗体作为二抗,再加入辣根过氧化物酶标记的羊抗兔抗体与二抗反应,并通过催化底物显色以检测样品中是否含有JEV抗原。经过方阵滴定,确定了一抗的最佳包被浓度为5μg/mL,二抗和辣根标记抗体的最佳稀释度分别为1：10000和1：30000。敏感性试验表明,该方法的敏感性可达到104PFU/mL,并且该方法不与其它常见的猪流行病病毒发生交叉反应,对5份样品进行重复性检验的变异系数分别为7.60%、6.70%、6.70%、7.60%、4.40%,均小于10%,将包被的酶标板置于37℃连续5天,标准阴阳性对照的OD值均没有发生明显变化。以上结果说明,本研究所建立的JEV双抗体夹心ELISA抗原检测方法具有敏感性高、特异性强、稳定性好等优点。2.JEV双抗体夹心ELISA抗原检测方法的临床初步应用分别用RT-PCR方法和制备的双抗体夹心ELISA试剂盒对60份临床样品进行检测(包括16份人脑脊液样品、20份蚊子样品、24份猪脑样品),并将二者检测结果进行对比。结果表明：与RT-PCR方法相比,JEV双抗体夹心ELISA检测方法的阳性符合率为70%,阴性符合率为100%,总符合率可达到90%。说明本研究建立的JEV ELISA抗原检测方法与RT-PCR方法具有较高的符合率,可以作为JEV临床快速检测的有效工具。