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人血清白蛋白（Human Serum Albumin, HSA）是一种由肝细胞合成的可溶性单体蛋白质,占血浆总蛋白的60%,具有多种重要的生理功能,同时也是制药工业中不可缺少的辅料之一,作为产品居国际市场血液制剂销售额的首位。目前临床应用的HSA主要从人血液中分离,但由于血源缺乏以及潜在的污染风险,基因重组人血清白蛋白成为替代产品的首选。本研究利用基因重组的方法,在大肠杆菌中表达了人血清白蛋白,并制备了重组人血清白蛋白的多克隆抗体,建立了双抗体夹心ELISA检测方法,获得了以下结果：1.采用RT-PCR的方法从人胚肺二倍体细胞中扩增HSA基因,构建pGEX-4T-1-rHSA原核表达载体,并实现HSA在大肠杆菌中的表达。结果显示：扩增出HSA片段为1755bp,符合预期；构建的pGEX-4T-1-rHSA与NCBI上的HSA（登录号NM000477.5）核苷酸和氨基酸序列同源性均为100%,重组表达载体构建成功；表达产物具有良好的反应原性,能与HSA抗体发生特异性的结合反应。2.表达的重组人血清白蛋白经变性、复性及GST琼脂糖凝胶FF亲和层析纯化后作为免疫原免疫家兔,制备HSA多克隆抗体。经丙烯葡聚糖凝胶层析纯化后,应用间接ELISA和Western-blot方法对制备的抗体进行鉴定。结果表明：重组蛋白多数以包涵体的形式存在,分子量大小约为93kD；重组蛋白具有良好的免疫原性；应用其制备的抗血清效价可达到1：100000；纯化的多克隆抗体与表达的重组人血清白蛋白和血浆来源的HSA均能产生特异性结合,具有良好的生物学活性。3.利用鼠单抗及制备的兔多抗为基础,初步建立了HSA的双抗体夹心ELISA检测方法；最佳条件为：包被液为0.4μg/mL纯化的兔抗人血清白蛋白多克隆抗体；封闭液为1%牛血清白蛋白；酶标抗体为1：20000稀释的鼠抗人血清白蛋白-HRP；样品反应时间为60min；酶标抗体作用时间为60min；显色时间为15min；该方法特异性及重复性较好,线性检测范围为0.39mg/mL,为建立快速简便的HSA检测方法提供基础。综上,本研究成功构建了HSA原核表达载体,制备了HSA兔多克隆抗体,建立了基于HSA的双抗体夹心ELISA检测方法,为HSA的检测提供一种方法。