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第一部分KCTD12在慢性社会挫败应激所致小鼠抑郁样行为中的作用目的:钾通道四聚化结构域12(potassium channel tetramerization domain-containing 12,KCTD12)是KCTD家族的一员,它是γ-氨基丁酸B型受体(γ-aminobutyric acid B receptor,GABABR)的一个辅助亚基,已有报道KCTD12参与调节恐惧记忆和双向情感障碍等精神疾病,但是KCTD12在抑郁症中的作用尚不清楚,因此本文研究KCTD12在慢性社会应激导致的小鼠抑郁行为中的作用。方法:采用慢性社会挫败应激(chronic social defeat stress,CSDS)暴露诱导小鼠抑郁样行为,并运用社会接触实验和糖水偏好实验评价小鼠抑郁样行为;运用实时定量聚合酶链式反应(quantitative real-time PCR,q RT-PCR)检测目的基因在小鼠各脑区的表达;免疫蛋白印迹(western blotting)检测目的蛋白在各脑区的表达;组织免疫荧光检测目的分子在细胞上的表达;脑区定位注射病毒研究沉默KCTD12基因对CSDS诱导小鼠抑郁样行为的影响。结果:(1)经慢性社会挫败应激,易感小鼠表现出明显的抑郁样行为,与正常对照组相比,糖水偏好比率明显下降(p<0.001),社会接触时间比值明显减少(p<0.001)(2)与正常对照组相比,KCTD12在应激敏感鼠的海马、内侧前额叶皮层(medial prefrontal cortex,m PFC)、杏仁核,海马齿状回(dentate gyrus,DG)、CA1和CA3区的基因表达水平均没有明显改变。(3)与正常对照组相比,KCTD12在应激敏感鼠DG区的蛋白表达水平明显增加(p<0.001),但KCTD12在应激敏感鼠的海马CA3区的蛋白表达水平明显下降(p<0.05)。(4)组织和细胞免疫荧光显示KCTD12在胶质细胞和神经元中均有表达,而且在应激敏感鼠DG区的表达明显比正常对照鼠中高。(5)DG区给予KCTD12沉默病毒明显改善应激敏感鼠的社会逃避行为,社会接触时间比值增加(p<0.001)。结论:慢性社会挫败应激诱导小鼠抑郁样行为,在应激敏感鼠的海马区特别是DG区KCTD12的蛋白表达明显上调;DG区给予KCTD12沉默病毒显著下调KCTD12的表达,并改善小鼠的抑郁样行为。第二部分KCTD12介导慢性社会挫败应激所致小鼠抑郁样行为的机制目的:KCTD12可以与γ-氨基丁酸B型受体亚基2(γ-aminobutyric acid B receptor 2,GB2)结合,但其在抑郁症中与GB2的结合是否发生改变,以及KCTD12是否通过调控GABAB受体信号通路来参与抑郁症的发病尚不清楚。此外选择性五羟色胺再摄取抑制药(selective serotonin reuptake inhibitor,SSRI)抗抑郁药氟西汀的作用靶点十分广泛,KCTD12是否是氟西汀的一个作用靶点也不清楚。因此,本部分主要研究KCTD12对慢性社会挫败应激诱导的小鼠抑郁样行为的作用机制。方法:运用免疫蛋白印迹(western blotting)检测相关信号通路中关键蛋白的表达,腹腔给予GABAB受体的选择性拮抗剂CGP35348和SSRI抗抑郁药氟西汀检测社会接触(social interaction test)和悬尾实验(tail suspension test)的改变。结果:(1)免疫蛋白印迹实验结果显示,与正常对照鼠相比,应激敏感鼠的DG区中GB2表达增加(p<0.01)。(3)免疫荧光双标结果显示GB2和KCTD12在DG区表达均上调。(4)腹腔给予剂量为3mg/kg的GABAB受体选择性拮抗剂CGP35348两周后明显改善应激敏感鼠社会逃避行为(p<0.001);悬尾不动时间降低(p<0.001)(3)腹腔给予CGP35348两周后明显降低应激敏感鼠DG区KCTD12和GB2的表达上调(p<0.001,p<0.01)。(5)腹腔注射氟西汀两周使应激敏感鼠的社会接触比值上升(p<0.001),悬尾不动时间减少(p<0.001)。(6)腹腔注射氟西汀两周后使应激敏感鼠DG区上调的KCTD12和GB2表达下降(p<0.001,p<0.001)。结论:与正常对照鼠相比,应激敏感鼠的DG区中GB2的表达明显上调,提示应激敏感鼠中DG区的GABAB信号通路可能上调,给予GABAB受体选择性拮抗剂可以改善应激敏感鼠的抑郁行为,同时抑制KCTD12和GB2的表达上调,提示KCTD12改善抑郁样行为与GABAB受体信号通路上调有关。应激敏感鼠给予氟西汀后可以恢复其抑郁行为并下调KCTD12和GB2的表达,提示KCTD12可能是氟西汀抗抑郁作用的一个靶点。