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目的:体外条件下研究慢性髓细胞白血病细胞株K562对大鼠来源骨髓间充质干细胞成骨、成脂分化能力改变的影响,为进一步研究白血病微环境下 BM-MSCs发生的改变提供实验基础。 方法: 1.细胞来源:本实验所需BM-MSCs来源于同济医学院动物中心提供的SPF级SD大鼠(雄性,体重100±10g)由。原代分离并培养SD大鼠(3-4周龄)骨髓间充质干细胞,取第三代MSC流式鉴定并用于实验;研究所需K562细胞来源华中科技大学同济医学院附属协和医院血液病研究所。 2.实验分组和共培养:本实验共分为三组,A组为MSC单独培养体系(对照组),B组为MSC与K562直接共培养体系,C组为MSC与K562间接共培养体系。 3.实验方法:共培养48h后加入成骨、成脂诱导培养基对共培养的MSC进行诱导,诱导21天进行茜素成骨染色、14天进行成脂油红O染色,并通过RT-PCR技术测定成骨基因mRNA(Runx2、ALP、BSP、OCN)和成脂基因mRNA(PPARγ、Wnt-5b、LPL)的相对表达量。 结果:直接共培养组和非直接共培养组MSC成骨茜素染色和 mRNA表达量低于对照组,而直接共培养组低于非直接共培养组,结果具有统计学意义;直接共培养和非直接共培养组MSC成脂分化染色和mRNA表达则强于对照组,非直接共培养组成脂染色和mRNA表达量则高于直接共培养组,结果具有统计学意义; 结论: 1.BM-MSCs在K562模拟的CML白血病微环境下成骨分化能力下降,成脂分化能力反而增强,直接共培养组成骨成脂均能力低于间接共培养体系; 2.BM-MSCs与K562共培养后成骨分化能力受到了K562的抑制,且直接接触使BM-MSCs成骨分化能力受到抑制更强;共培养后成脂分化能力受到了K562的促进作用,直接接触相对于间接接触组抑制了BM-MSCs成脂分化能力; 3.K562可能通过直接或间接接触改变了白血病微环境中BM-MSCs的成骨成脂分化能力,更有利于白血病的进程。