【摘 要】
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以蓝色犁头霉（Absidia coerulea）作为生产菌株,以RSA（17α-羟基-孕甾-4-烯-3,20-二酮-21-醋酸酯）为底物,进行氢化可的松（Hydrocortisone,HC）生物转化的过程中,存在底物投料浓度低,副产物多等问题。本实验室前期通过诱变育种筛选出一株转化率相对较高的菌株AL-172,但是对其高浓度生物转化工艺未进行研究。本课题中将投料浓度增加一倍（5 g/L）,旨在高浓
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以蓝色犁头霉（Absidia coerulea）作为生产菌株,以RSA（17α-羟基-孕甾-4-烯-3,20-二酮-21-醋酸酯）为底物,进行氢化可的松（Hydrocortisone,HC）生物转化的过程中,存在底物投料浓度低,副产物多等问题。本实验室前期通过诱变育种筛选出一株转化率相对较高的菌株AL-172,但是对其高浓度生物转化工艺未进行研究。本课题中将投料浓度增加一倍（5 g/L）,旨在高浓度底物投料的情况下,通过优化发酵条件,选择适宜的底物投料方式以及建立新的发酵工艺等方式来提高氢化可的松的生产效率。考察了培养基中酵母浸出物种类和添加量对蓝色犁头霉转化RSA的影响,结果表明在种子培养基中添加2 g/L的酵母粉,发酵培养基中添加2.5 g/L酵母粉,氢化可的松的转化率较原始的培养基的提高了 8.87%。研究了不同底物引入方式对蓝色犁头霉转化RSA的影响,结果表明采用乙醇超声分散底物投料,最终氢化可的松转化率达到67.67%,而且此法操作简单。并考察了最适的乙醇添加量,发现使用5%的乙醇超声投料后氢化可的松转化率增加到68.45%,与加热回流法相比提高了 2.45%。在此基础上考察了诱导及分批投料对转化的影响,结果表明发酵培养5 h用0.3 g/L RSA进行诱导,投料时采用二次投料,先投入4 g/L RSA,转化6 h后再补齐底物至5g/L,产物HC生成率可达72.98%。研究了 pH对蓝色犁头霉转化RSA的影响。结果表明:投料时调节pH至5.6,转化6 h后再次调节pH至5.6,氢化可的松的产率达到73.88%。研究了细胞稀释工艺对蓝色犁头霉转化RSA的影响,确定工艺条件为:种子转接量为15%,28℃,摇床转速180 r/min,培养至pH为3.8左右菌体处于稳定期前期,菌丝干重达到8.2 mg/mL以上时,按照稀释比0.5:1（10mL）稀释,调节pH投料转化48 h,HC生成率为74.56%,与对照组相比,HC生成率增加7.31%,且α-HC的生成率降低了 2.91%。为工业上生产氢化可的松提供了技术支持与理论依据。
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