【摘 要】
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草鱼是中国最主要的淡水养殖鱼种,但随着高密度集约化养殖模式的不断发展,病害问题日益突出,尤其是细菌性疾病的大量出现为草鱼养殖业带来严重经济损失。近年来,抗生素滥用使得细菌耐药性增加,迫切需要寻找可以替代抗生素控制细菌感染的方法。铁调素(Hepcidin)是鱼体自身分泌的抗菌肽和铁调节因子,具有增强免疫等多种作用,被认为是传统抗生素的理想替代品。本研究探究了铁调素及其激动剂对草鱼生长性能、免疫力和肠
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草鱼是中国最主要的淡水养殖鱼种,但随着高密度集约化养殖模式的不断发展,病害问题日益突出,尤其是细菌性疾病的大量出现为草鱼养殖业带来严重经济损失。近年来,抗生素滥用使得细菌耐药性增加,迫切需要寻找可以替代抗生素控制细菌感染的方法。铁调素(Hepcidin)是鱼体自身分泌的抗菌肽和铁调节因子,具有增强免疫等多种作用,被认为是传统抗生素的理想替代品。本研究探究了铁调素及其激动剂对草鱼生长性能、免疫力和肠道健康的影响,旨在开发绿色安全的抗生素替代品来预防鱼类细菌性疾病。主要研究内容及结果如下:1.铁调素的不同投喂方式对草鱼生长、免疫和肠道微生物的影响将450尾草鱼随机分为5个组,即对照组(Control组:每天投喂基础饲料组)和4个处理组(Ci Hep-3d组:每3天饲喂一次铁调素;Ci Hep-7d组:每7天饲喂一次铁调素;Ci Hep+CS-3d组:每3天饲喂一次铁调素和壳聚糖;Ci Hep+CS-7d组:每7天饲喂一次铁调素+壳聚糖),其中,处理组在其余时间均投喂基础饲料。投喂试验周期为8周,投喂实验结束后进行攻毒,并在攻毒前和攻毒后第7天进行取样,检测生长性能、免疫保护率、铁代谢水平、组织病理损伤、免疫基因表达水平和肠道微生物变化等指标。结果显示:口服Ci Hep和CS可以有效促进草鱼生长,提高草鱼存活率以及免疫保护力,其中Ci Hep+CS-3d组的存活率(55%)最高,并显著高于对照组的存活率(33%)。口服Ci Hep和CS还可以降低机体血清铁水平,促进铁在肝胰脏中积累,从而限制细胞外细菌可利用铁含量。此外,口服Ci Hep和CS可以有效调节炎症反应,减轻鳃组织病理损伤。同时,Ci Hep和CS还可以改变草鱼肠道微生物的组成和多样性,显著提高有益微生物菌群比例。最重要的是,Ci Hep-3d组和Ci Hep+CS-3d组的生长指标和先天免疫指标均高于其他三组,其中Ci Hep+CS-3d组存活率最高。综上所述,连续3天间隔3天的投喂方式的保护效果优于连续7天间隔7天的投喂方式的保护效果,而Ci Hep和CS联合使用的保护效果优于单独使用Ci Hep,这为铁调素及其它免疫增强剂在水产养殖中的应用提供了重要参考。2.铁调素中草药激动剂对草鱼生长、免疫和肠道健康的影响选取四种中草药,分别是盐酸小檗碱(BBR)、葡萄籽原花青素(GSP)、迷迭香酸(RA)和黄芪多糖(APS)。将4种中草药分别作用于草鱼肝细胞(L8824),通过实时荧光定量PCR(q RT-PCR)技术检测hepcidin和ferrtin基因表达情况。将筛选后的铁调素中草药激动剂和L8824细胞共孵育,然后进行嗜水气单胞菌攻毒,通过结晶紫染色分析细胞的存活情况来检测中草药预防效果。将在细胞水平预防效果较好的铁调素中草药激动剂饲喂草鱼,实验草鱼随机分为4组,即对照组(Control)、葡萄籽原花青素组(GSP)、盐酸小檗碱组(BBR)、葡萄籽原花青素和盐酸小檗碱组(GSP+BBR)。实验周期为4周,在攻毒前和攻毒后的第3天进行取样。细胞水平结果显示,GSP和BBR能够显著上调hepcidin和ferrtin基因表达水平。结晶紫染色结果发现,GSP和BBR可以显著提高L8824细胞被细菌感染后的存活率,并且GSP+BBR组的存活状态最好,提示GSP和BBR可以作为铁调素的激动剂,并且二者联合使用可以更有效地提高细胞感染细菌后的存活率。在个体水平,通过检测生长性能、保护率、组织载菌量、血清免疫、组织病理损伤和免疫基因变化等指标分析GSP和BBR预防细菌感染的效果。结果显示:口服GSP和BBR可以有效促进草鱼的生长,提高草鱼存活率,显著增强血清先天性免疫指标水平。口服GSP和BBR还可以降低血清胆固醇等脂代谢指标含量。此外,口服GSP和BBR可以显著降低攻毒后草鱼头肾、脾脏、肝胰脏和后肠组织中的细菌载量,提高攻毒后脾脏和头肾组织中免疫基因IL-1β、IL-6、TNF-α的表达水平,明显减轻肠道组织病理损伤。综上所述,这些结果显示GSP和BBR作为铁调素激动剂可有效促进草鱼的生长,改善免疫状态,提高脂代谢,降低疾病发生率,提示GSP和BBR作为天然的铁调素激动剂在草鱼的养殖中有极大的应用潜力。
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