论文部分内容阅读
目的：胃癌是全球发病率最高的恶性肿瘤之一，且是第二大癌症致死病因，近年发现抑癌基因启动子区异常甲基化与肿瘤的发生发展密切相关，RUNX3基因是与胃癌相关的重要抑癌基因之一，由于抑癌基因的甲基化具有可逆性，因此通过研究5-Aza-dC和TSA对胃腺癌细胞系SGC-7901及胃癌裸鼠模型进行干预，分析药物对抑癌基因RUNX3甲基化水平、mRNA表达水平和蛋白表达水平的影响，为5-Aza-dC和TSA应用于胃癌的临床治疗提供实验基础。方法：①体外培养胃癌细胞系SGC-7901，取对数生长期的细胞随机分为正常对照组、5-Aza-dC组、TSA组及5-Aza-dC+TSA组并根据实验设计方案对各组细胞进行药物干预；②饲养BALB/c nu/nu裸鼠，将胃癌细胞SGC-7901悬液注射到裸鼠皮下建立胃癌裸鼠模型，随机分为正常对照组、5-Aza-dC组、TSA组及5-Aza-dC+TSA组，每组6只，按照实验设计方案对各组裸鼠进行干预；③分别提取各组细胞及胃癌裸鼠模型皮下移植瘤中的DNA、RNA及蛋白；④分别采用甲基化特性定量PCR、半定量逆转录PCR法（SqRT-PCR）、蛋白免疫印迹法(Western-Blot)检测各组细胞及胃癌裸鼠模型皮下移植瘤中RUNX3基因的启动子区甲基化状态、mRNA及蛋白表达水平，并分析所得试验结果。结果：RUNX3基因在胃癌细胞SGC-7901及细胞种植瘤组织中甲基化程度较高、mRNA及蛋白表达水平较低，5-Aza-dC和TSA均能降低胃癌细胞SGC-7901及胃癌裸鼠模型皮下移植瘤中RUNX3基因启动子区的甲基化水平，提高mRNA及蛋白表达水平;两药联合组较单药组在降低RUNX3基因启动子区甲基化水平及提高mRNA和蛋白表达水平上效果更明显。结论：胃癌细胞系SGC-7901及胃癌裸鼠模型皮下移植瘤中抑癌基因RUNX3启动子区甲基化状况与其表达水平相关，胃癌细胞系及胃癌裸鼠模型皮下移植瘤中RUNX3基因启动子异常甲基化可能是导致其基因沉默的主要机制之一。5-Aza-dC和TSA均能诱导胃癌细胞系SGC-7901中RUNX3基因去甲基化并提高表达，同时两药联合起到协同作用，为临床应用5-Aza-dC和TSA提供了实验基础。