SSR引物开发及梅花分子框架遗传图谱的构建

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梅花(Prunus mume Sieb.et Zucc)是我国的传统名花,在园林中应用广泛。目前梅花的相关研究涉及范围比较广,包括种质资源多样性、常规育种繁殖栽培、离体组织培养和分子生物学等;分子标记在梅花品种分类研究中的应用较为深入,但尚未有梅花分子遗传图谱构建的报道。本实验以‘雪梅’为母本和‘粉皮宫粉’为父本,杂交得到的F1作为作图群体,在开发SSR标记的基础上,用AFLP和SSR标记构建梅花框架遗传图谱。主要研究结果如下:1.梅花F1作图群体的建立以‘雪梅’为母本、‘粉皮宫粉’为父本进行杂交,得到杂交子代群体56株。2.作图群体的AFLP分析对512对AFLP引物进行筛选,得到多态性较高、条带清晰的引物24对。利用筛选出的引物对F1群体进行多态性分析,得到167个标记,其中父本特有标记51个,母本特有标记56个,双亲共有标记73个。3.SSR引物来源。从蔷薇科基因组数据库(http://www.bioinfo.wsu.edu/gdr/)搜索和下载梅花同属近缘种SSR引物,主要为杏和桃SSR引物序列,并进行合成,得到引物89对;同时,利用父本‘粉皮宫粉’基因组DNA,采用FIASCO法结合磁珠富集法开发SSR引物。得到引物52对,其中含AG重复引物50对,含CAG重复引物2对。4.作图群体的SSR分析。对SSR引物进行筛选,得到17对在F1群体中存在多态性、重复性强,且条带清晰的引物。对F1群体进行多态性分析得到12个多态性位点,其中父本4个,母本5个,双亲共有标记3个。5.框架遗传图谱的构建。利用JOINMAP3.0分别对父母本进行分析,构建框架遗传图谱。‘粉皮宫粉’图谱包含14个连锁群共有42个标记,覆盖基因组长度为305cM。‘雪梅’图谱包含14个连锁群共有48个标记,覆盖基因组长度为232cM。
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