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柿树炭疽病是哈锐炭疽菌(Colletotrichum horii)引起的柿树重要病害,严重时可对柿产业造成极大的经济损失。哈锐炭疽菌初次侵染柿树时,会经历无症状阶段(或称活体营养阶段)和有明显症状的危害阶段这两个阶段,即经历一定时间的活体营养,再杀死寄主细胞,向死体营养转换。推测哈锐炭疽菌FSTF (Fungal specific transcriptional factor)基因可能和活体营养相关,但尚无实验证据。为了研究哈锐炭疽菌FSTF基因的功能,本文分别设计了哈锐炭疽菌FSTF基因的左臂和右臂引物,左臂引物引入EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ酶切位点,右臂引物引入Pst I和Hind Ⅲ酶切位点,以哈锐炭疽菌基因组DNA为模板通过PCR克隆得到FSTF基因的左臂和右臂,连接于pMD 19-T载体。从其它载体上克隆得到潮霉素抗性基因,通过引物引入Xba Ⅰ酶切位点,并连接于pMD 19-T载体。将上述重组载体用相应的限制性内切酶酶切,按照左臂+潮霉素抗性基因+右臂的顺序连接到pCAMBIA-1300载体,构建出哈锐炭疽菌FSTF基因的敲除载体pCAMBIA-1300-H-L-R.WRKY75是植物WRKY转录因子家族中的一员。核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)可侵染油菜引发油菜菌核病,对油菜危害极大。有研究发现油菜在受到菌核病侵染的过程中,其WRKY75 (BnWRKY 75)的转录本水平会剧烈上升,但目前对BnWRKY 75在油菜抵御菌核病侵染过程中的作用仍不够了解。本实验室已获得一些BnWRKY 75的正义和反义油菜转化子。本文利用这些转化子探索了BnWRKY75转录因子对油菜抵御核盘菌侵染过程中p-1,3-葡聚糖酶、几丁质酶、L-苯丙氨酸解氨酶这3种重要的植物抗病防御酶活性的影响。实验结果显示,BnWRKY 75的反义转化可提高油菜抗核盘菌过程中的β-1,3-葡聚糖酶和L-苯丙氨酸解氨酶活性。