缺氧条件下大鼠髓核细胞中HIF-1α与自噬的相关性研究

来源 :皖南医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jbdh2009
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目的:通过控制氧气含量模拟正常髓核细胞的低氧环境,研究探讨低氧环境能否诱导大鼠髓核细胞发生自噬,并进一步研究低氧状态下髓核细胞中缺氧诱导因子-1α分子的表达量与LC3、Beclin1等自噬标志性分子的表达量是否具有一定的相关性。方法:取体重均一、无椎间盘退化的健康成年SD大鼠,处死后取其尾骨并提取髓核细胞,采用差速贴壁法将提取的髓核细胞纯化后予以传代培养,待髓核细胞传至第三代时,通过显微镜观察其细胞形态,然后将第三代髓核细胞分别予以苏木精-伊红染色法和Ⅱ型胶原酶免疫荧光染色法进行染色,观察细胞形态及染色结果完成对于髓核细胞的鉴定。通过鉴定确定所提取细胞为大鼠髓核细胞后,取第三代髓核细胞,将其随机分为A、B、C、D 4个组。将A组置于正常氧含量下(37℃、5%CO2、20%O2)培养;B组置于低氧状态下(37℃、5%CO2、1%O2)培养;C组细胞首先采用HIF-1α-siRNA转染,然后置于与B组同样的低氧条件下培养;D组髓核细胞则是将自噬抑制剂3-MA[1]加入其内,然后同样置于与B组相同的低氧环境下培养。将上述四组细胞培养8小时后提取各组细胞蛋白与RNA,然后采用Western blot技术与qRT-PCR技术检测各组细胞中缺氧诱导因子-1α与LC3等自噬相关基因的表达量。结果:通过观察所提取细胞的形态与染色结果,确定所提取纯化细胞为大鼠髓核细胞。Western blot技术和qRT-PCR技术能够检测到大鼠髓核细胞中缺氧诱导因子-1α与自噬标志性分子的的表达。与A组比较,B组髓核细胞中缺氧诱导因子-1α与自噬标志性分子[2]LC3、Beclin1的表达量均大幅度增加,差异有统计学意义(P<0.05)。与B组比较,C组中髓核细胞缺氧诱导因子-1α与自噬标志性分子的表达量均显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。与B组比较,D组中髓核细胞自噬标志性分子LC3等的表达量显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);而缺氧诱导因子-1α的表达量则与B组髓细胞相差无几(P>0.05)。结论:低氧环境能够诱导大鼠髓核细胞发生自噬且低氧环境下大鼠髓核细胞中缺氧诱导因子-1α与自噬具有一定的相关性,即缺氧诱导因子-1α表达量的降低能够下调大鼠髓核细胞的自噬水平,而自噬标志性分子表达量的降低则对缺氧诱导因子-1α的表达影响甚微。
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