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目的；从细胞、亚细胞和分子水平研究石斛生物总碱对缺氧缺糖所致原代培养神经元损伤的保护作用及其机制，探讨石斛生物总碱对脑缺血再灌损伤神经元的保护作用，为脑缺血再灌损伤的治疗提供一种新的有效的神经保护剂。
方法；以乳鼠大脑皮质神经元为研究对象，原代培养至第9天以低糖结合物理性缺氧(95％N2+5％CO2)模拟体内缺血性损伤，以复氧和复糖模拟再灌注损伤。设置空白组、模型组、溶媒组、石斛生物总碱高、中、低剂量组和阳性对照组。分别在缺氧缺糖(1h、2h、4h)和缺氧缺糖2h/复氧复糖(3h、12h、24h)等不同时点通过MTT检测细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率检测细胞损伤程度、细胞凋亡率、线粒体膜电位(MMP)、细胞内游离Ca2+浓度及光镜和透视电镜观察病理形态学的变化来评价石斛生物总碱对脑缺血再灌损伤神经元的保护作用；并运用实时定量多聚酶链反应(RT-PCR)检测凋亡相关基因caspase-3、caspase-12的表达以探讨相关作用机制。
结果；1.缺氧损伤后MTT吸光度值明显下降：各模型组与同时点空白组吸光度值比较均有显著性差异(P＜0.01)；缺氧缺糖1h、2h各剂量组、缺氧4h高剂量组可提高MTT吸光度值，与同时点模型组比较均有差异(P＜0.05)；缺氧2h/复氧3h各剂量组、缺氧2h/复氧12h中、高剂量组、缺氧2h/复氧24h高剂量组可提高MTT吸光度值，与同时点模型组比较均有差异；2.缺氧损伤后LDH漏出率明显升高：各模型组与同时点空白组比较均有显著性差异(P＜0.01)；缺氧1h中、高剂量组、缺氧2h各剂量组、缺氧4h高剂量组可降低LDH漏出率；缺氧2h/复氧3h中、高剂量组、缺氧2h/复氧12h中、高剂量组、缺氧2h/复氧24h高剂量组使LDH漏出率下降，与同时点模型组比较均有差异(P＜0.05)；3.缺氧缺糖2h/复氧复糖12h损伤后神经细胞凋亡率显著升高：模型组与空白组比较有显著性差异(P＜0.01)；石斛生物总碱各剂量组均可降低细胞凋亡率，与模型组比较有差异(P＜0.05或0.01)；4.缺氧缺糖2h/复氧复糖12h损伤后细胞内游离Ca2+浓度均显著升高：模型组与空白组比较有显著性差异(P＜0.01)；各剂量组可降低细胞内游离Ca2+浓度，与模型组比较均有显著性差异(P＜0.01)；5.缺氧缺糖2h/复氧复糖12h损伤后MMP显著下降：模型组与空白组比较有显著性差异(P＜0.01)；石斛生物总碱各剂量组使MMP升高，与模型组比较均有显著性差异(P＜0.01)；6.缺氧缺糖2h/复氧复糖12h损伤后caspase-3和caspase-12表达显著升高：模型组细胞与空白组比较有显著性差异(P＜0.01)；石斛生物总碱各剂量组均可降低caspase-3和caspase-12的表达，与模型组比较有显著性差异(P＜0.01)；7.形态学观察：缺氧损伤后细胞失去折光性，胞体轮廓模糊，突起减少或回缩、断裂，HE检测发现模型组细胞还有核固缩、浓染等现象，电镜微观结构观察线粒体肿胀，嵴断裂、模糊；石斛生物总碱组损伤比模型组明显减轻。
结论：石斛生物总碱能明显减轻缺氧缺糖/复氧复糖致原代培养神经元损伤，其作用机制可能涉及：改善能量代谢、减少凋亡、抑制细胞内Ca2+超载和抑制凋亡特异性蛋白酶等多种因素。