【摘 要】
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目的： 建立能够稳定表达具有内吞功能的hTFR1的CHO细胞系。 方法： 从高表达hTFR1的人红白血病细胞系K562细胞中扩增hTFR1的全长基因,并将该基因导入pEGFP-C1真核表达
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目的： 建立能够稳定表达具有内吞功能的hTFR1的CHO细胞系。 方法： 从高表达hTFR1的人红白血病细胞系K562细胞中扩增hTFR1的全长基因,并将该基因导入pEGFP-C1真核表达载体中;采用脂质体转染法将重组质粒转入CHO中,并筛选稳转细胞系;使用Western Blot及流式细胞术检测hTFR1在CHO细胞表达,采用流式细胞术及免疫荧光细胞化学检测方法检测hTFR1的内吞功能。 结果： RT-PCR扩增获得2283bp大小片段,克隆至pEGFP-C1,经测序为目的核苷酸序列,成功构建pEGFP-C1-hTFR1;pEGFP-C1-hTFR1线性化后转染CHO细胞,G418筛选获得稳转细胞系CHO-hTFR1;Western Blot结果显示细胞表达hTFR1,流式细胞术检测表明hTFR1在细胞膜表达;流式细胞术及细胞免疫荧光检结果表明细胞膜表达的TFR1能够与抗hTFR1的McAb及TF结合,而且能够将结合的抗体及TF内吞摄入细胞,内吞率为81.48％±2.83％。 结论： 成功构建了含hTFR1全长序列的真核表达载体,稳定转染CHO细胞后获得能够表达具有内吞功能的hTFR1的CHO细胞系。
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