狂犬病是重要的人兽共患病,能引起人和哺乳动物的急性致死性中枢神经系统的自然疫源性疾病,病死率几乎100％。据世界卫生组织报道,99%以上的狂犬病死亡病例发生在包括我国在内的发展中国家。许多动物都可以感染及传播本病,家犬是我国人狂犬病的主要传染来源。由于缺少安全有效、价格低廉、使用方便的动物狂犬病疫苗,加之群众意识淡薄,我国家犬的免疫覆盖率极低,野生动物更无狂犬病的计划免疫。因此,从病毒的传染源下手,对动物接种兽用狂犬病疫苗是预防人狂犬病的最好办法。　　 狂犬病病毒(Rabies virus,RV)是负链RNA病毒,具有5种结构基因:N、P、M、G和L。其中N抗原性和N基因序列已作为狂犬病病毒属分型和狂犬病病毒分组的重要依据,G基因是编码能够诱导动物机体产生狂犬病病毒中和抗体的糖蛋白的基因,因此对RVN基因和G基因的研究具有十分深远的意义。本研究的第一部分利用RT-PCR方法成功克隆了RV街毒株CZTT-1株的N基因和G基因,并进行了序列测定和分析,在分子水平上对RV街毒株CZTT-1株的遗传背景做了分析和阐述,对后面将RV CZTT-1株应用于攻毒试验检测疫苗的有效性奠定了基础。　　 本研究第二部分第一章利用本实验室已经成功拯救获得的携带双G基因的重组狂犬病毒HEP-Flury(dG)株作为候选疫苗株,进行灭活疫苗的研制。首先用BHK-21细胞大量增殖狂犬病病毒HEP-Flury(dG)株,用直接免疫荧光实验对其进行鉴定和滴度测定。将已测定滴度的病毒用终浓度为0.025%的β-丙内酯进行灭活。然后分别以3日龄乳鼠和BHK-21细胞作为载体对灭活病毒进行检验,检测灭活剂的灭活效果。灭活检验合格的病毒液经无菌检验后,分别选用PIKA、ESSALIMP和ESSAL GEL佐剂制成三种水剂狂犬病病毒灭活疫苗,进行小鼠免疫试验筛选最适佐剂。试验表明,ESSAL,GEL佐剂狂犬病灭活疫苗免疫组的狂犬病病毒抗体效价明显高于PIKA、ESSAL IMP佐剂狂犬病毒灭活疫苗免疫组,而且与商品化疫苗差异不显著。狂犬病病毒HEP-Fiury(dG)株免疫原性良好,ESSAL GEL,佐剂是该候选疫苗株的最适佐剂。　　 本研究第二部分第二章对ESSAL GEL,佐剂灭活疫苗进行了深入研究,分别进行了佐剂最佳配比试验,冷冻干燥和冷冻干燥浓缩试验,抗原最佳滴度试验。结果表明,ESSAK GEL佐剂占10%比例所制备的疫苗组较其它三种比例疫苗组所产生的狂犬病毒保护性抗体水平更高更早,冻干疫苗组及冻干后浓缩疫苗组效果均比冻干前差,抗原最适滴度为108 FFU/mL。　　 为了研究疫苗的安全性和免疫效果,用检定合格的ESSAL GEL佐剂灭活疫苗分别进行了大剂量免疫试验,怀孕犬免疫试验,宠物犬安全试验,保存期试验,最小免疫剂量试验,免疫持续期试验和攻毒保护试验。在本试验中,用ELISA方法对疫苗免疫后的犬血清抗体进行了检测,用NIH法对疫苗效力进行测定。结果表明,HEP-Flury(dG)株ESSAL GEL佐剂灭活疫苗对宠物犬和怀孕犬是安全的,保存期较长,免疫持续期可达一年,与进口商品化疫苗差异不显著,攻毒保护率达到要求,说明该灭活疫苗保护性良好。