【摘 要】
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[目的]本研究的目的是为了验证长链非编码RNA UCA1在乳腺癌中的功能,并初步阐述其促进基底型乳腺癌进展的机制,为基底型乳腺癌的治疗提供新靶点和思路。[方法]1.通过在HCC1806和HCC1937细胞中敲低KLF5,RNA-seq找到其下游调控的长链非编码RNAUCA1,并通过RT-qPCR检测KLF5和UCA1表达水平。2.运用SRB实验、克隆形成实验、细胞凋亡和划痕实验检测敲低UCA1对H
【基金项目】
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国家自然科学基金（82060481）；
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[目的]本研究的目的是为了验证长链非编码RNA UCA1在乳腺癌中的功能,并初步阐述其促进基底型乳腺癌进展的机制,为基底型乳腺癌的治疗提供新靶点和思路。[方法]1.通过在HCC1806和HCC1937细胞中敲低KLF5,RNA-seq找到其下游调控的长链非编码RNAUCA1,并通过RT-qPCR检测KLF5和UCA1表达水平。2.运用SRB实验、克隆形成实验、细胞凋亡和划痕实验检测敲低UCA1对HCC1806和HCC1937细胞存活、克隆形成和凋亡和迁移的影响。3.敲低UCA1,RNA-seq找到其下游调控的靶基因CCND1,并通过WB实验验证。4.通过在 HCC1806 和 HCC1937 细胞中转染 miRNA mimics,WB 和 RT-qPCR检测下游靶基因CCND1表达,在过表达KLF5的HCC1806细胞中敲低UCA1,RT-qPCR 检测 Cyclin D1 RNA 的表达。5.生物信息学分析UCA1表达与乳腺癌患者预后相关性。[结果]1.UCA1受到KLF5正向调控,敲低KLF5,UCA1表达下调,反之,过表达KLF5,UCA1表达上调。2.UCA1在乳腺癌中发挥促癌功能,敲低UCA1显著抑制HCC1806和HCC1937细胞存活、迁移和克隆形成,促进细胞凋亡。3.在HCC1806和HCC1937细胞中敲低UCA1,通过RNA-seq找到其下游调控的靶基因CCND1,WB验证发现敲低UCA1,CCND1编码的蛋白Cyclin D1表达下调。4.在 HCC1806和HCC1937细胞中转染 miRNA 9851-3p mimics 和hsa-miR-593-5p mimics,WB检测Cyclin D1蛋白水平下调,回复实验证明KLF5部分通过UCA1调控Cyclin D1。5.生物信息学分析显示了UCA1高表达与乳腺癌患者不良预后相关,这为乳腺癌患者的预后提供了潜在指标。[结论]我们在HCC1806和HCC1937细胞中敲低KLF5,通过RNA-seq找到了其下游调控的UCA1,并通过RT-qPCR验证UCA1受到KLF5正向调控。紧接着我们通过细胞增殖、克隆形成、细胞凋亡和迁移等实验证明了 UCA1在BLBC中的促癌作用。机制上,我们通过RNA-seq找到了 KLF5和UCA1下游调控的靶基因CCND1,根据核质分离的结果UCA1主要分布于细胞质中,我们考虑UCA1可能通过海绵化miRNA来调控CCND1。我们通过在miRDB网站预测到与可能参与UCA1调控Cyclin D1的miRNAs,并在HCC1806和HCC1937细胞中转染候选的miRNA mimics,通过WB检测发现hsa-miR-9851-3p mimics和hsa-miR-593-5p mimics 使 Cyclin D1 蛋白水平明显下调,KLF5 对 Cyclin D1 的调控部分依赖于UCA1。
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