【摘 要】
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目的:探讨负性协同刺激分子B7-H4对小鼠间充质干细胞株C3H10T1/2细胞(简称C3H10)增殖及生存的影响和作用机制。方法:利用RNA干扰技术,分别构建稳定遗传的B7-H4靶向shRNA转染的C3H10-shRNA-B7H4-1,C3H10-shRNA-B7H4-2,转染空载病毒的 C3H10-NC 细胞株。选取明显下调B7-H4表达的C3H10-shRNA-B7H4-1组为实验组,C3H1
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目的:探讨负性协同刺激分子B7-H4对小鼠间充质干细胞株C3H10T1/2细胞(简称C3H10)增殖及生存的影响和作用机制。方法:利用RNA干扰技术,分别构建稳定遗传的B7-H4靶向shRNA转染的C3H10-shRNA-B7H4-1,C3H10-shRNA-B7H4-2,转染空载病毒的 C3H10-NC 细胞株。选取明显下调B7-H4表达的C3H10-shRNA-B7H4-1组为实验组,C3H10-NC组为对照组,C3H10组为空白对照组进行后续实验。分别采用CCK-8法、细胞计数法以及Western blot不同的方法检测各组的细胞增殖情况,FCM检测细胞周期及细胞凋亡,Western blot检测各组中与增殖相关的细胞周期蛋白Cyclin D1及凋亡相关蛋白Bcl-2、BAX、Caspase-3、Caspase-9 的表达情况。结果:(1)FACS、Western blot和免疫荧光染色(IF)显示:C3H10组成性高表达B7-H4,B7-H4靶向shRNA干扰C3H10后其B7H4的表达率明显降低(P<0.05);(2)与C3H10-NC相对比,C3H10-shRNA-B7H4-1的增殖能力明显降低(P<0.05);(3)C3H10-shRNA-B7H4-1组细胞G0/G1期明显增加(P<0.05),并且早期凋亡明显增多(P<0.05),晚期凋亡无明显统计学差异(P=0.717);(4)C3-H10-shRNA-B7H4-1组细胞周期调控蛋白Cyclin D1下调,促进凋亡蛋白BAX、Caspase-3、Caspase-9上调,抑制凋亡蛋白Bcl-2下调。结论:负性协同刺激分子B7-H4在小鼠间充质干细胞C3H10T1/2中组成性高表达,并与其细胞的增殖、生存密切相关,其机制可能与B7-H4参与细胞周期调控,和阻止细胞凋亡有关。
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