用低毒病毒—板栗疫病菌系统筛选抗病毒化合物的模型研究

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药物筛选模型是用于证明某种物质具有药理活性(生物活性、治疗作用)的实验方法,这些实验方法是寻找和发现药物的重要条件之一。理想的筛选方法应该具有明显的检测标记,而且高效、简便。但是对大多数RNA病毒而言,理想的筛选方法还非常缺乏。尤其在抗植物病毒和真菌病毒病的药物开发方面,目前还没有简易、快速和高效的筛选方法。无病毒的丝状真菌板栗疫病菌具有桔黄色的表型,而感染了低毒病毒(一种双链RNA病毒)的板栗疫病菌则具有菌丝体为白色的稳定的表型。当带毒株失去可自主复制的低毒病毒时,菌丝体变为桔黄色。本实验利用这种颜色变化作为判断病毒存在与否或其浓度水平的一个方便的初步标记。用市面有代表性的广谱抗病毒药物处理这种带病毒菌株,然后根据用药前后菌株颜色的变化,以及对用药前后病毒进行荧光定量分析,从而判断所用药物对RNA病毒的复制是否有抑制作用,或对受RNA病毒感染的真菌的症状是否有缓解作用。结果表明,在该系统中,抗病毒药物对带病毒株系处理后,菌丝体颜色表型变化最为明显,荧光定量结果表明病毒量的变化与菌丝体颜色变化存在相关性,即随着药物浓度的增加,菌丝体颜色逐渐加深,而病毒dsRNA的量则相对减少。其中在EP721/EP721(-)系统中最为明显,Euro7/Euro7(-)系统中次之,而由于EP713中所带病毒量较大,使得同样药物的量对其影响较小,因此在EP713/EP155系统中菌丝体颜色表型变化以及病毒量的变化不甚明显。但考虑到EP721有脱毒的可能性,因此认为Euro7/Euro7(-)系统是比较适合的筛选模型。
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