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本文对云南虫草属(Cordyceps)野生资源调查,在大理州云龙县鲁庄道人山采集到一种虫草的新鲜材料,经形态鉴定,确定为凉山虫草Cordyceps liangshanensis Zang,Liu et Hu。通过分离菌核组织,得到21株形态一致的纯菌株,鉴定为被毛孢属的一新种,命名为凉山被毛孢Hirsutella liangshanensis H.Yu et Z.L.Yang sp.nov.。本论文以凉山被毛孢菌株Clia-19为试验材料,主要进行凉山被毛孢形态特征和培养特性研究,并分析了其主要功效成分的含量。
采用形态分类学方法鉴定凉山虫草的无性型为被毛孢属一新种,描述其菌落、菌丝、产孢细胞、分生孢子形态、大小、着生方式等特征;应用扫描电镜观察其产孢细胞的超微结构。通过测定凉山虫草和凉山被毛孢ITS序列,并予以比对,确认凉山虫草无性型即凉山被毛孢,为传统分类进一步提供了分子生物学的有力佐证。同时构建被毛孢属17种真菌共30条ITS序列的系统树,探讨凉山被毛孢在被毛孢属的系统位置。
为掌握凉山被毛孢菌株Cliao-19的培养特性,本研究采用单因子实验,以其菌丝体在平皿培养基上的菌落直径为指标,筛选出最适菌丝体生长的碳源为玉米粉,最适氮源为黄豆粉,最适生长温度为15℃,最适生长pH值为5.5。采用正交实验筛选固体培养Clia-19菌株培养基配方,得出最佳培养基配方为:玉米粉1.5%,黄豆粉2.5%,洋芋粉1.0%,蔗糖1.0%,KH2PO30.1%。
以冬虫夏草功效成分为对照,采用硫酸.苯酚法测定虫草多糖,用紫外分光光度计测定甘露醇、总皂苷和总黄酮,用HPLC法测定虫草核苷类。分析表明,野生凉山虫草的甘露醇和总皂苷高于野生冬虫夏草,其虫草多糖、总黄酮和核苷类成分平均值均低于野生冬虫夏草。凉山被毛孢经过培养条件优化,虫草多糖比野生凉山虫草有所提高,并高于野生冬虫夏草。