布鲁氏菌病(Brucellosis)是由布鲁氏菌(Brucella)引起的传染性疾病,给畜牧业的发展造成巨大的的经济损失。该菌能经过皮肤粘膜和呼吸道等途径侵入机体引起感染和发病。布鲁氏菌病的易感动物种类很多,其中羊、牛、猪最易感。BP26具有良好的抗原性,是由细胞内向外释放的可溶性外周蛋白,相对于固定的外膜蛋白,具有易于检测的的特点。BP26在各布鲁氏菌种中的相似性较高,所以适合做布鲁氏菌病的诊断抗原。为了对流产布鲁氏菌BP26蛋白进行抗原表位研究,设计了3个相互重叠15个氨基酸、覆盖整个BP26蛋白的重叠短肽,经克隆并在大肠杆菌中实现了融合表达。用流产型布鲁氏菌感染的阳性血清对3个融合蛋白进行免疫印迹分析,初步鉴定出BP26蛋白B细胞线性抗原表位位于第51～165aa处。根据上述结果,针对BP262(51～165aa)短肽,将其分为5个相互重叠10个氨基酸的短肽片段,进一步鉴定出了BP26蛋白B细胞线性表位位于第109～141aa氨基酸区域。此基础上,又进行了第三轮的抗原表位筛选,针对BP262.4(109～141aa)短肽设计了6个相互重叠5个氨基酸的短肽片段,经磷酸化退火后与表达载体pET-32a进行融合表达及纯化,通过VVestern-blot鉴定具有抗原性的片段为第118～132aa处。最后,为了进一步缩短BP26蛋白的B细胞线性表位,进行了第四轮的筛选,针对BP262.4.3(118～127aa)和BP262.4.4(123～132aa)短肽设计了9个氨基酸的短肽片段,经磷酸化退火后与表达载体pET-32a进行融合表达及纯化,通过、Vestern-blot鉴定结果显示,BP26蛋白B细胞线性表位区位于N端的123～127aa处。综合上述研究结果,流产布鲁氏菌BP26蛋白的B细胞线性抗原表位区位于第123～127aa区域,而此区域在其他布鲁氏菌中是一个高度保守的区域。对流产布鲁氏菌BP26蛋白的B细胞线性抗原表位鉴定,从而进一步了解布鲁氏菌的抗原结构提供理论数据支持。