论文部分内容阅读
目的探讨miR-192-5p通过靶定ZEB2对胰腺癌(PC)细胞增殖、迁移侵袭以及上皮间质转化(EMT)的影响,为胰腺癌的特异性靶向治疗提供实验依据。方法1 qRT-PCR、Western blot检测正常胰腺导管上皮细胞HPNE和胰腺癌细胞PANC-1和As PC-1中miR-192-5p和ZEB2的表达水平。2 CCK-8、集落形成、划痕和Transwell实验分析转染miR-192-5p mimics或inhibitor对PANC-1和As PC-1细胞增殖、迁移和侵袭的影响。3 qRT-PCR和Western blot检测转染miR-192-5p mimics或inhibitor对PANC-1和As PC-1细胞EMT标志物表达的影响。4生物信息学网站预测miR-192-5p的候选靶基因,双萤光素酶报告载体实验验证miR-192-5p与候选靶基因的靶定关系。5 Starbase数据库分析miR-192-5p与ZEB2在胰腺癌组织中表达的相关性。6 CCK-8、集落形成、划痕、Transwell和免疫荧光实验检测敲降或过表达ZEB2对PANC-1和As PC-1细胞增殖、迁移、侵袭及EMT标志物表达的影响。7 CCK-8、Transwell和免疫荧光实验分析过表达ZEB2是否能够挽救miR-192-5p对PANC-1细胞增殖、迁移、侵袭能力及EMT的抑制作用。结果1 qRT-PCR和Western blot实验结果显示,与HPNE细胞相比,在PANC-1和As PC-1细胞中miR-192-5p表达显著降低,ZEB2的m RNA和蛋白表达显著升高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。2 CCK-8结果显示,与mimics NC组相比,转染miR-192-5p mimics的PANC-1和As PC-1细胞增殖能力显著降低;而与inhibitor NC组相比,转染miR-192-5p inhibitor的PANC-1和As PC-1细胞增殖能力明显增强,差异均具有统计学意义(P<0.05)。3集落形成实验结果表明,与mimics NC组相比,转染miR-192-5p mimics的PANC-1和As PC-1细胞集落形成能力显著下降;而与inhibitor NC组相比较,转染miR-192-5p inhibitor的PANC-1和As PC-1细胞集落形成能力增强,差异均具有统计学意义(P<0.05)。4划痕和Transwell实验结果显示,与mimics NC组相比,转染miR-192-5p mimics的PANC-1和As PC-1细胞迁移和侵袭能力显著降低;相反,与inhibitor NC组相比,转染miR-192-5p inhibitor的PANC-1和As PC-1细胞迁移和侵袭能力明显增强,差异均具有统计学意义(P<0.05)。5生物信息学预测和双萤光素酶报告实验结果提示,相较于mimics NC与ZEB2-3’UTR质粒共转染组,共转染miR-192-5p mimics与ZEB2-3’UTR质粒的293T细胞、PANC-1和As PC-1细胞中萤光素酶活性均显著降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。而相较于mimics NC与ZEB2-3’UTR-mut质粒共转染组,在293T细胞、PANC-1和As PC-1细胞中共转染miR-192-5p mimics与ZEB2-3’UTR-mut质粒后,萤光素酶活性无明显变化。6 Starbase数据库分析表明,胰腺癌组织中ZEB2与miR-192-5p的表达呈负相关,差异具有统计学意义(P<0.05)。7 CCK-8、集落形成、划痕、Transwell、qRT-PCR、Western blot和免疫荧光实验结果提示,与si-NC对照组相比,敲降ZEB2抑制PANC-1和As PC-1细胞的增殖、迁移和侵袭,抑制EMT进程;而与pc DNA3.1对照组相比,过表达ZEB2促进PANC-1和As PC-1细胞的增殖、迁移和侵袭,促进EMT进程,差异均具有统计学意义(P<0.05)。8 CCK-8、Transwell和免疫荧光实验揭示过表达ZEB2能够挽救miR-192-5p对PANC-1细胞增殖、迁移、侵袭能力及EMT的抑制作用,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论1过表达miR-192-5p或敲降ZEB2抑制胰腺癌细胞PANC-1和As PC-1的增殖、迁移和侵袭及EMT进程。2抑制miR-192-5p或过表达ZEB2促进胰腺癌细胞PANC-1和As PC-1的增殖、迁移和侵袭及EMT进程。3 miR-192-5p可能通过靶向ZEB2抑制胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭及EMT进程。图 25 幅;表 0 个;参 80 篇。