研概背景膝关节骨性关节炎(Knee Osteoarthritis,KOA)是目前严重影响患者生活质量的主要疾病之一,并已成为国内外学者关注的重点。流行病学调查研究表明,本病患病率为95.6%,其中60岁以上的人群患病率高达49%[1],不仅影响了患者的生活质量,而且往往加重了患者的经济负担。针刀疗法治疗膝骨关节炎临床疗效显著,研究人员多从形态学、分子生物学等方面对针刀治疗K0A的作用机理进行研究,对于K0A软组织的损伤和修复研究相对较少,本实验通过观察模型兔股直肌细胞的凋亡情况,探讨针刀干预对膝骨关节炎损伤与修复的影响,明确针刀治疗K0A的作用机制,为针刀治疗K0A提供治疗思路和理论依据。研究目的膝骨关节炎前期多中心临床实验研究表明,针刀疗法治疗膝骨关节炎疗效显著。本实验采用左后肢伸直位固定制动法制成膝骨关节炎兔模型,釆用针刀松解法进行治疗,并与电针治疗做对照,观察针刀干预对膝骨关节炎股直肌细胞凋亡及Caspase-3表达的影响,从股直肌细胞凋亡的角度揭示针刀治疗膝骨关节炎可能的作用机制,为针刀治疗膝骨关节炎提供理论依据。研究方法将24只6月龄健康清洁级新西兰家兔(雌雄各半),随机分为四组:正常组、模型组、电针组、针刀组,采用左后肢伸直位固定法制备膝骨关节炎樓型。运用膝关节X线观察K0A模型兔的影像学变化,采用HE染色光镜观察K0A模型兔股直肌细胞的形态学变化,TUNEL法检测股直肌阳性凋亡细胞核数,免疫组化法观察股直肌中Caspase-3的阳性表达数量,以研究针刀干预对模型兔股直肌中凋亡细胞的影响。研究结果1.造模6周后,对兔的一般情况进行观察,结果显示:造模组兔膝关节出现局部肿胀,精神萎靡,活动量明显减少(左下肢处于伸直位状态),趾端充血明显,跛行明显。兔膝关节影像学X线正位片观察,正常组兔膝关节硬化及囊性变均不明显,股骨髁、胫骨平台关节缘骨质增生均未出现,膝关节边缘未见骨赘显现,软骨下骨密度均匀,无硬化或囊性变。模型组造模后:膝关节影像学X线正侧位片可见膝关节组织结构发生较明显的变化,可见左膝关节胫骨平台出现明显的骨质增生、关节表面凹凸不平、兔膝关节内外侧间隙变窄、膝关节呈失稳状态。上述结果表明此种造模方法不仅有效,且效果较好。2.兔股直肌HE染色光镜观察结果显示:造模后,模型组肌细胞核增多,核内移;肌纤维着色不均,出现溶解变性、水肿,呈波浪状、节段状扭曲改变;间质细胞及结缔组织增生及瘢痕形成,见炎性细胞浸润;针刀干预后,肌纤维较平直且未见明显地扭曲改变,说明针刀干预能促进股直肌组织的良性转变,对股直肌的修复有较好的效果。3.TUNEL结果显示:造模后,模型组兔股直肌TUNEL阳性细胞核计数正常组明显升高,二者相比有显著差异(P<0.01);针刀组与正常组相比无明显差异(P>0.05);针刀组较模型组明显降低,二者有显著差异(P<0.01);电针组较正常组明显差异(P<0.05);电针组与模型组有明显差异(P<0.05);针刀组与电针组有明显差异(P<0.05)。4.Caspase-3表达结果显示:造模后,模型组较正常组明显升高,二者相比有显著差异(P<0.01);针刀组与正常组无明显差异(P>0.05);针刀组较模型组明显降低,二者有显著差异(P<0.01);电针组较正常组无明显差异(P>0.05);电针组与模型组差异显著(P<0.01);针刀组与电针组相比无明显差异(p>0.05)。研究结论1.针刀干预可以减轻膝骨关节炎兔局部组织的炎症反应,促进组织修复。2.针刀干预能减少KOA模型兔股直肌细胞凋亡数量,减轻膝骨关节炎的病理损伤。3.针刀干预影响Caspase-3的表达,抑制KOA模型兔股直肌细胞凋亡,这可能是针刀松解法治疗KOA的机制之一。