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[目 的]研究miR-34a在体外和体内对肺腺癌细胞侵袭、迁移、增殖及克隆等恶性生物学行为的影响,以及miR-34a在肺腺癌恶性生物学行为中的可能靶点,并在组织样本层面验证miR-34a、MTA2、FOXM1的表达量及miR-34a与MTA2、FOXM1的相关性。[方法]1、通过生物合成剂miR-34a-mimics过表达miR-34a,通过CCK实验、平板克隆形成实验比较各组细胞克隆、增殖形成能力,综合评价miR-34a对肺腺癌A549、XWLC-05细胞克隆、增殖能力的影响。2、细胞划痕实验、Transwell迁移实验评价miR-34a对肺腺癌细胞A549、XWLC-05细胞迁移能力的影响。3、Transwel l侵袭实验检测各组细胞侵袭能力,评价mi R-34a对肺腺癌细胞A549、XWLC-05细胞侵袭能力的影响。4、通过生物信息学分析,初步筛选出MYC、MTA2、FOXM1、FOXP1、MDM4、MYB、ULBP2、SIRT1这八个与miR-34a相关性较大的靶基因,采用实时荧光定量聚合酶链反应法(RT-qPCR)检测miR-34a、MYC、MTA2、FOXM1、FOXP1、MDM4、MYB、ULBP2、SIRT1的表达量,筛选出与miR-34a相关性最高的靶基因。5、建立肺腺癌裸鼠皮下移植瘤瘤模型,绘制肿瘤生长曲线,分析肿瘤重量情况。RT-qPCR检测miR-34a、MTA2、FOXM1在各组移植瘤中的表达水平。6、收集云南省肿瘤医院30例肺腺癌与远端配对对照组织的样本,通过RT-qPCR验证miR-34a、MTA2、FOXM1在癌与正常组织中的表达情况,并分析miR-34a与MTA2、FOXM1及与淋巴转移、病理分期的关系。7、实验数据分析作图采用SPSS23.0软件包和GraphPad Prism 6.0进行,实验数据采用均数±标准差(x±s)方式表达,当组间两两比较时采用独立样本t检验,多组间比较用单因素方差分析,以P<0.05为有统计学差异。miRNA及mRNA的表达与TNM分期、淋巴结转移等临床关系用Chi-Square检验,miRNA的表达与下游靶基因的关系用Spearman检验。[结果]1、CCK法绘制细胞生长曲线:空白组与NC组间生长曲线差异无显著性(p>0.05);miR-34a-mimics组细胞增殖显著低于NC组及空白组(p<0.05)。2、Tanswell侵袭实验:A549细胞组:miR-34a-mimics组侵袭细胞数显著低于空白组和NC组(p<0.05),空白组和NC组侵袭细胞数无显著差异性(p>0.05)。XWLC-05细胞:miR-34a-mimics组侵袭细胞数显著低于空白组和NC组(p<0.05),空白组和NC组侵袭细胞数无显著差异(p>0.05)。3、细胞划痕实验:A549细胞:空白组和NC组平均向划痕区迁移率间差异无显著性(p>0.05)。而高表达miR-34a的miR-34a-mimics组细胞平均向划痕区迁移率显著低于空白组和NC组(p<0.05)。XWLC-05细胞:空白组平均向划痕区迁移率和NC组平均向划痕区迁移率间差异无显著性(p>0.05)。而高表达miR-34a的miR-34a-mimics组细胞平均向划痕区迁移率显著低于空白组和NC组(p<0.05)。4、Tanswell迁移实验:A549细胞:miR-34a-mimics组迁移细胞数显著低于空白组和NC组(p<0.05),空白组和NC组迁移细胞数无显著差异(p>0.05)。XWLC-05细胞:miR-34a-mimics组迁移细胞数显著低于空白组和NC组(p<0.05),空白组和NC组迁移细胞数无显著差异(p>0.05)。5、平板克隆形成实验,A549细胞:空白组平均克隆形成数和NC组平均克隆形成数显著高于miR-34a-mimics组平均克隆形成数(p<0.05);空白组和NC组间差异无显著性(p>0.05)。XWLC-05细胞:空白组平均克隆形成数和NC组平均克隆形成数显著高于miR-34a-mimics组平均克隆形成数(p<0.05);空白组和NC组间差异无显著性(p>0.05)。6、MTA2、FOXM1在miR-34a过表达组中表达量降低最明显,差异有统计学意义(p<0.05),选择MTA2、FOXM1为后续实验靶点。7、各组裸鼠皮下接种肿瘤细胞5天后,全部成瘤。移植瘤生长曲线:miR-34a组移植瘤生长速度显著低于A549-NC细胞组(p<0.05);终点时间第25天时,A549-miR-34a组裸鼠平均体积显著小于A549-NC细胞组(p<0.05);A549-miR-34a组裸鼠平均质量显著小于A549-NC细胞组(p<0.05)。8、RT-qPCR检测肿瘤组织中miR-34a、MTA2、FOXM1的表达水平,结果显示A549-miR-34a组中miR-34a的表达量明显高于NC组(p<0.05);高表达miR-34a的A549-miR-34a组中MTA2、FOXM1的表达水平明显低于NC组,差异具有统计学意义(p<0.05)。9、组织样本中miR-34a在肺腺癌患者正常组织表达量显著高于肺腺癌组织,MTA2、FOXM1在肺癌患者癌组织的表达量显著高于正常组织。miR-34a表达量在肺腺癌组织中与MTA2、FOXM1均存在负相关关系10、miR-34a、MTA2、FOXM1的表达量与肺腺癌患者是否淋巴转移、病理分期无明显相关性。[结论]1、miR-34a可能通过调控MTA2、FOXM1抑制肺腺癌的增殖,迁移、侵袭和克隆。2、miR-34a在肺腺癌组织中低表达,而MTA2、FOXM1表达上调;mi R-34a与MTA2、FOXM1在肺腺癌组织中均成负相关性。