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艾叶,是一味常用中药,传统中医理论认为其味辛、苦,性温,归肝、脾、肾经,有小毒。艾叶的化学成分比较复杂,主要含有挥发油、多糖、黄酮类、鞣质、微量元素等多种成分,这些成分既可能是其发挥药理作用的物质基础,也可能是其产生毒理作用的物质基础。现代研究已经证实:挥发油是艾叶导致急性肝毒性的主要物质基础,氧化应激所致的肝细胞损伤可能是其主要发生途径;而肝细胞线粒体功能障碍是药物诱发肝损伤的主要机制。因此,有必要深入研究艾叶挥发油急性肝毒性的线粒体机制。 目的: 通过氧化应激、肝细胞线粒体结构和功能障碍方面探讨艾叶挥发油急性肝毒性的线粒体机制。 方法: 1. ICR小鼠70只,SPF级,体重为20±2 g,雌雄各半,随机分为7组,分别是0 g?kg-1(溶媒组),2.2 g?kg-1,2.5 g?kg-1,2.8 g?kg-1,3.2 g?kg-1,3.7 g?kg-1,4.2 g?kg-1,组间距为1:0.88,灌胃容量为0.2 mL?10g-1,给药后连续观察14天,记录动物死亡比率,根据改良寇氏法计算艾叶挥发油的半数致死量(LD50)及其95%的可信区间。 2. ICR小鼠,52只,SPF级,体重为20±2 g,雌雄各半,随机分为5组,分别为空白对照组(溶媒组,A组)、2.5 g?kg-1四氯化碳组(阳性对照组,B组)、1.9 g?kg-1艾叶挥发油组(C组)、2.3 g?kg-1艾叶挥发油组(D组)、2.7 g?kg-1艾叶挥发油组(E组),灌胃容量为0.2 mL?10g-1,在给药后6 h,眼眶静脉丛取血,全自动生化分析仪检测ALT、AST、ALP、TB了解肝功能的变化;肝脏组织采用H.E.染色,光镜观察肝脏病理组织学变化,Ridit分析评价肝脏病理组织学变化;黄嘌呤氧化酶法检测肝脏组织SOD,硫代巴比妥酸法检测肝脏组织MDA,化学比色法检测肝脏组织GSH和GSSG,分光光度计法检测肝脏组织抗超氧阴离子自由基及产生超氧阴离子自由基;差速离心法提取肝脏组织线粒体,JC-1荧光探针法检测线粒体膜电位,分光光度计法检测线粒体肿胀敏感性,定磷法检测ATP酶活力。 结果: 1.艾叶挥发油的LD50为3.13 g?kg-1;平均可信限为0.44 g?kg-1,其95%可信限区间为2.91~3.35 g?kg-1。 2.与空白对照组比较,不同剂量的艾叶挥发油给药6 h后,血清ALT、AST、ALP含量具有显著的统计学差异(P<0.05),血清TB含量无统计学差异(P>0.05);不同剂量的艾叶挥发油组间比较,血清ALT、AST、ALP也均具有显著的统计学差异(P<0.05),并且是随着剂量的增加呈增加趋势。与空白对照组比较,不同剂量的艾叶挥发油给药6 h后对小鼠肝脏组织损伤具有显著性的统计学差异(P<0.05);不同剂量的艾叶挥发油组间的肝脏组织损伤比较也具有显著的统计学差异(P<0.05),并且随剂量的增加,对肝脏组织的损伤呈上升趋势。与空白对照组比较,不同剂量的艾叶挥发油给药6 h后均能引起小鼠肝脏组织中MDA含量具有显著的统计学差异(P<0.05);不同剂量的艾叶挥发油组间比较,小鼠肝脏组织中MDA含量也均具有显著的统计学差异(P<0.05),并且随着剂量的增大,MDA的含量呈增加趋势。与空白对照组比较,艾叶挥发油D组、E组在给药6 h后肝脏组织中SOD活力具有显著的统计学差异(P<0.05),C组在给药6 h后肝脏组织SOD活力无统计学差异(P>0.05);不同剂量的艾叶挥发油组间比较肝脏组织SOD活力具有显著的统计学差异(P<0.05),并且随剂量的增加呈增加趋势。与空白对照组比较,不同剂量的艾叶挥发油组小鼠肝脏组织中的GSH和GSSG含量具有显著的统计学差异(P<0.05),随着艾叶挥发油剂量的增大,小鼠肝脏组织中的GSH含量呈降低趋势,而GSSG的呈增加趋势;不同剂量艾叶挥发油组间比较,肝脏组织中的GSH和GSSG含量具有显著的统计学差异(P<0.05)。与空白对照组比较,不同剂量的艾叶挥发油组产生超氧阴离子自由基活力具有显著的统计学差异(P<0.05);不同剂量的艾叶挥发油组间比较,产生超氧阴离子自由基活力也均具有显著的统计学差异(P<0.05),并且随着剂量的增加呈增加趋势。 3.与空白对照组比较,不同剂量艾叶挥发油引起小鼠肝脏组织线粒体膜电位变化具有显著的统计学差异(P<0.05);不同剂量艾叶挥发油组间比较引起小鼠肝脏组织线粒体膜电位变化具有显著的统计学差异(P<0.05),随着剂量增加膜电位呈下降趋势。与空白对照组比较,不同剂量的艾叶挥发油ΔA540nm的变化具有显著的统计学差异(P<0.05);不同剂量艾叶挥发油组间比较ΔA540nm变化具有显著的统计学差异(P<0.05),并且随着艾叶挥发油的剂量的增加呈下降趋势。与空白对照组比较,不同剂量的艾叶挥发油组对线粒体Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶、Mg2+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活力的影响具有显著性统计学差异(P<0.05);艾叶挥发油不同剂量组间比较对Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活力的影响具有显著的统计学差异(P<0.05),即随着艾叶挥发油的剂量增加,Na+-K+-ATP酶、、Ca2+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活力表现为不同程度的抑制;艾叶挥发油不同剂量组间比较对线粒体Mg2+-ATP酶活力影响无统计学差异(P>0.05) 结论: 1.艾叶挥发油具有急性肝毒性,其急性肝毒性可能直接或者间接由肝细胞损伤诱发。 2.艾叶挥发油急性肝毒性的机制可能与氧化应激相关。 3.艾叶挥发油急性肝毒性的机制可能与肝细胞线粒体的结构和功能障碍相关。