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目的:探究促泌素(secretagogin,SCGN)在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导胰岛β细胞内质网应激及细胞凋亡发生中的调控作用及分子机制。方法:1.通过油红O染色、BODIPY染色、CCK8实验、流式细胞术分别检测经不同浓度ox-LDL处理小鼠胰岛MIN6细胞后脂质蓄积、细胞活力及细胞凋亡情况。2.运用蛋白质免疫印迹实验(western blot,WB)检测SCGN、内质网应激相关蛋白(PERK,p-PERK,p-eIF2α,eIF2α,ATF4,CHOP)及凋亡相关蛋白Cleaved Caspase3的蛋白表达水平。3.采用siRNA技术降低MIN6细胞SCGN表达水平,进而观察SCGN-siRNA与ox-LDL(40μg/ml)处理组细胞内质网应激相关蛋白(PERK,p-PERK,p-eIF2α,eIF2α,ATF4,CHOP)及凋亡相关蛋白Cleaved Caspase3的表达变化。4.构建SCGN重组质粒(recombinant SCGN,rSCGN)转染MIN6细胞,构建稳定高表达SCGN细胞株。通过流式细胞术及WB实验检测空白对照组(control)、ox-LDL处理组(ox-LDL)、ox-LDL+rSCGN组、ox-LDL+PBA(4-苯基丁酸钠)组、ox-LDL+rSCGN+PBA组细胞凋亡率及内质网应激相关蛋白的变化,进一步明确SCGN对MIN6细胞内质网应激及细胞凋亡的影响。5.利用生物信息学方法,预测ATF4与SCGN间的相互作用及潜在结合位点,并通过免疫共沉淀方法(CO-IP)证实MIN6细胞中ATF4与SCGN的相互作用关系。结果:1.油红O及BODIPY检测结果表明随着ox-LDL处理浓度的增加,MIN6细胞内脂质蓄积逐渐增加,细胞活力逐渐下降而凋亡逐渐增加。2.ox-LDL处理MIN6细胞24小时后,SCGN表达明显下调,p-PERK、p-eIF2α、ATF4、CHOP及Cleaved Caspase3表达明显升高。3.SCGN-siRNA可促进ATF4及下游CHOP、Cleaved Caspase3蛋白的表达,但对PERK、p-PERK、eIF2α、p-eIF2α蛋白表达无影响,提示SCGN是通过调控ATF4/CHOP/Cleaved Caspase3信号通路而影响MIN6细胞内质网应激。4.流式细胞术及WB实验均发现rSCGN或PBA预处理可部分抑制ox-LDL诱导的MIN6细胞内质网应激及凋亡,而rSCGN联合PBA处理较SCGN或PBA单独处理能取得更好的抑制效果,这一结果提示SCGN/ATF4与PERK/eIF2α/ATF4通路共同参与ox-LDL诱导MIN6细胞内质网应激的调控5.生物信息学分析及CO-IP实验证实在MIN6细胞中SCGN与ATF4存在相互作用。结论:1.在胰岛β细胞中SCGN能与ATF4结合,并负调控ATF4的表达。2.SCGN/ATF4信号通路上调ox-LDL诱导的胰岛β细胞内质网应激及所导致的细胞凋亡。