不孕症是影响人类生殖健康的一个主要问题。现如今,许多不孕患者通过辅助生殖技术解决了生育难题。然而,临床上有部分患者经历了多次IVF/ICSI治疗周期的失败,这给他们带来了巨大的躯体和经济负担。早期胚胎发育阻滞是导致IVF/ICSI周期反复失败的主要原因之一。随着全外显子组测序技术的广泛应用,目前已发现了多个与人类早期胚胎发育阻滞相关的致病基因,但只能解释一小部分病例,仍有众多的早期胚胎发育阻滞患者的病因不明确。第一部分TLE6基因突变与早期胚胎发育阻滞目的:第一部分研究拟从IVF/ICSI周期中反复出现早期胚胎发育阻滞的患者中筛选出已知致病基因的新发突变位点。方法:招募以反复早期胚胎发育阻滞为特征的原发性不孕症女性患者,收集他们及其家系成员的外周血提取DNA,通过全外显子组测序和数据分析,比对已知的早期胚胎发育阻滞相关致病基因,筛选出已知致病基因的新发突变位点,并对候选突变进行Sanger测序验证。利用免疫荧光技术检测突变位点的表达与定位情况。结果:我们通过全外显子组测序在四名患者（来自三个独立家系）中发现了TLE6（transducin-like enhancer of split 6）基因三个新的突变位点c.1631＿1632del CA（p.Pro544Argfs*5）,c.475＿476del CT（p.Leu159Aspfs*14）和 c.798＿799ins G（p.Gln267Alafs*54）,以及一个先前已报道的突变位点c.222G＞C（p.Gln74His）。这些双等位基因突变可导致早期胚胎发育阻滞和女性不孕。免疫荧光结果显示TLE6基因纯合移码突变c.1631＿1632del CA显著降低了患者卵母细胞中TLE6蛋白的含量。结论:我们的研究扩大了TLE6基因的突变谱和表型谱,进一步证明了TLE6在人类早期胚胎发育中的重要作用。第二部分KPNA7基因突变与早期胚胎发育阻滞目的:第二部分研究拟从已知致病基因无法解释的反复早期胚胎发育阻滞的患者中筛选出新的致病基因。方法:招募以反复早期胚胎发育阻滞为特征的原发性不孕症女性患者,收集他们及其家系成员的外周血提取DNA,进行全外显子组测序,在已知的致病基因无法解释的病例中,着眼于有害的、罕见的且在卵巢中高表达或特异性表达的基因,以期发现新的致病基因。对候选突变进行Sanger测序验证。通过表达载体构建、质粒转染、蛋白质印迹等技术在293T细胞中研究候选基因突变产生的影响。结果:通过全外显子组测序,我们从一个非近亲家系中发现了KPNA7（karyopherin subunit alpha 7）基因纯合突变c.314＿315ins C（p.Leu106Serfs*6）。本研究发现的变异c.314＿315ins C是首次报道的KPNA7在人类早期胚胎发育阻滞中的突变。根据ACMG指南,该突变被判断为疑似致病变异。KPNA7是输入蛋白α家族的成员之一,负责运输与早期胚胎发育相关的关键核蛋白。蛋白质印迹结果显示,与野生型相比,KPNA7基因突变导致截短蛋白的产生。由此推测该突变可能损害了其作为核转运蛋白的功能,从而导致早期胚胎发育阻滞。结论:我们的研究发现了KPNA7基因纯合突变c.314＿315ins C与早期胚胎发育阻滞有关,这有助于我们理解KPNA7在人类早期胚胎发育中的作用,并为女性不孕症提供一个新的遗传标记。