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[研究目的]课题组前期实验研究表明丹参素(Danshensu, DLA)对B16F10黑色素瘤细胞转移具有抑制作用。运用分子对接技术进行丹参素分子靶标预测,推测丹参素可能对Neutrophil Collagenase、Ras-Ras Gap等蛋白具有一定作用,这些分子靶标则与肿瘤细胞粘附和侵袭环节相关。粘附和侵袭是黑色素瘤细胞血行转移过程中的关键步骤,本课题为了确证DLA对肿瘤转移中粘附和侵袭环节的作用,以黑色素瘤细胞粘附和侵袭生物学行为作为研究重点,并进行初步的机制探讨。[研究内容]实验研究部分共分为三部分,第一部分从肿瘤细胞粘附方面探讨DLA的作用,包括DLA对黑色素瘤细胞血行转移中粘附生物学行为的影响(与基质粘附的能力、细胞聚集能力、与血小板粘附的能力),第二部分进一步观察DLA对黑色素瘤细胞血行转移中相关粘附分子表达的影响,第三部分主要探讨DLA对黑色素瘤细胞血行转移中侵袭生物学行为的影响,包括降解基底膜和细胞运动两个方面。具体实验方法如下：粘附：细胞染色检测黑色素瘤细胞与基质粘附能力,慢速聚集法观察黑色素瘤细胞聚集能力,流式细胞技术以及荧光标记血小板的方法检测血小板与黑色素瘤细胞粘附的能力,并用Real-time PCR测定对黑色素瘤细胞粘附过程中重要的粘附分子MCAM、β3 integrin, E-cadherin的mRNA水平,Western blot测定MCAM蛋白表达,ELISA法检测sICAM-1释放量。侵袭：趋化小室法观察黑色素瘤细胞基底膜侵袭能力；划痕法观察黑色素瘤细胞运动能力的变化；应用Real-time PCR对黑色素瘤细胞降解基底膜酶类MMP2、MMP9及其抑制因子TIMP2和RECK进行mRNA水平表达的测定,并用Westernblot蛋白测定法对黑色素瘤细胞MMP2和TIMP2进行测定。[实验结果及结论]DLA对黑色素瘤细胞与基质粘附能力以及细胞聚集具有抑制作用,对血小板聚集和血小板与黑色素瘤细胞的粘附则无明显作用；同时DLA对A375黑色素瘤细胞粘附分子MCAM的mRNA和蛋白表达具有抑制作用,对A375细胞sICAM-1的释放亦有抑制作用。DLA对黑色素瘤细胞侵袭能力具有抑制作用,对侵袭过程中细胞运动能力和降解基底膜酶类表达均有一定的抑制作用。通过上述结果,可以初步看出DLA抑制黑色素瘤细胞血行转移,可能是通过影响黑色素瘤细胞粘附和侵袭行为而实现的。