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目的研究过表达醌型二氢生物喋呤还原酶(Quinoid dihydropteridine reductase,QDPR)在单侧输尿管梗阻的大鼠模型(Unilateral ureteral obstruction,UUO)中,是否通过影响KRAS及其下游通路进而影响纤维化的发生发展。方法选择24只3周龄的SPF级雄性SD大鼠,随机平均分成8组:假手术7天模型组(7d Sham,7S)、7天UUO模型组(7d UUO,7U)、7天空载过表达病毒对照组(UUO+overexpression lentivirus control 7d,7C)、7天QDPR过表达模型组(UUO+lentivirus overexpression QDPR 7d,7Q)、假手术14天模型组(14d Sham,14S)、14天UUO模型组(14d UUO,14U)、14天空载过表达病毒对照组(UUO+overexpression lentivirus control 14d,14C)、14天QDPR过表达模型组(UUO+lentivirus overexpression QDPR 14d,14Q)。通过单侧输尿管结扎的方法构建UUO模型,术后7天和14天安乐处死大鼠,Masson染色、免疫组织化学染色I型胶原、QDPR和KRAS,以及利用western blot检测QDPR和KRAS蛋白进而检测UUO模型中的纤维化情况及QDPR和KRAS的表达;免疫组织化学染色、胶体金技术、信息生物学、细胞器提取以及免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation,Co-IP)的方法检测在正常生理肾脏中QDPR和KRAS蛋白的相互作用情况。在此基础上,通过逆行注射慢病毒的方法构建过表达QDPR及其对照的动物模型,于术后7天和14天分别安乐处死大鼠,Masson染色和免疫组织化学染色I型胶原检测胶原纤维沉积情况,用免疫组织化学染色和western blot检测QDPR和KRAS的表达及定位情况,用western blot检测ECa、Erk、P-Erk、Akt、P-Akt、KRAS的表达情况。结果1成功构建了大鼠肾纤维化模型。2 7U模型组中QDPR和KRAS的蛋白含量低于7S组,14U模型组中QDPR和KRAS的蛋白含量低于14S组,并且QDPR和KRAS主要表达在肾小管。3在人和大鼠肾脏中,QDPR和KRAS均在肾小管中高表达,在肾小球中也均有少量表达,通过胶体金电镜技术发现QDPR在大鼠肾脏足突细胞膜表达,并且发现QDPR进入线粒体的可能性较高,亚细胞定位发现QDPR和KRAS均在线粒体和胞质中表达,Hex软件分析提示QDPR能够影响KRAS的功能,当利用Co-IP的实验方法在下拉QDPR的时候,利用western blot能够检测到KRAS,同时,当用Co-IP的实验方法在下拉KRAS的时候,利用western blot能够检测到QDPR。4成功构建过表达QDPR及其对照的UUO模型,7Q模型中QDPR较7C升高不明显,而14Q模型组的QDPR含量较14C显著增高(P<0.05)。5 14Q组ECa蛋白含量高于14C组(P<0.05)。6 14Q组KRAS蛋白含量高于14C组(P<0.05),Akt、P-Akt、P-Erk没有明显变化,而14Q组Erk蛋白含量显著高于14C组(P<0.05),P-Erk/Erk显著低于14C组(P<0.05)。结论1 QDPR和KRAS在UUO模型中被显著下调,提示QDPR和KRAS可能在肾间质纤维化中发挥重要的作用。2 QDPR和KRAS存在相似的定位,QDPR和KRAS均在肾小管中表达较高,在肾小球中也均有较少的表达,并且QDPR和KRAS均在线粒体和胞质中表达,而且在正常生理肾脏中QDPR和KRAS之间存在相互作用。3过表达QDPR能够改善肾纤维化,并且过表达QDPR可能通过抑制KRAS下游Erk通路进而改善UUO模型中的肾纤维化。图7幅;表2个;参128篇。