【摘 要】
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人参皂苷-α-鼠李糖苷酶能专—性的水解人参皂苷上的鼠李糖基,使人参皂苷Re转化为人参皂苷Rg1。本文主要针对微生物Absidia sp.G3g产人参皂苷-α-鼠李糖苷酶的基因克隆进行了
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人参皂苷-α-鼠李糖苷酶能专—性的水解人参皂苷上的鼠李糖基,使人参皂苷Re转化为人参皂苷Rg1。本文主要针对微生物Absidia sp.G3g产人参皂苷-α-鼠李糖苷酶的基因克隆进行了研究。比较几种提取总RNA的方法后,建立了适合微生物Absidia sp.G3g的RNA提取方法,即改进TakaRaRNAisoReagent试剂盒的方法。提取到的RNA完整性很好,在琼脂糖凝胶图片上,可以清楚的看见5S、18S和28S亚基。根据测得的人参皂苷-α-鼠李糖苷酶蛋白N端序列设计引物,使用RT-PCR的方法扩增出CDS区的基因部分序列。再根据测定的CDS区的基因部分序列设计引物,使用RACE的方法扩增出微生物Absidia sp.G3g产人参皂苷-α-鼠李糖苷酶的基因的全序列。调取微生物Absidia sp.G3g产人参皂苷-α-鼠李糖苷酶的完整CDS区基因,产物纯化后pMD19-T载体连接,转化大肠杆菌JM109感受态细胞。酶切鉴定结果表明目的片段克隆成功。对基因的核酸序列进行了测定,在NCBI中对序列结果进行了同源性比较,发现它与目前已知的鼠李糖苷酶基因无同源性。
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