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背景癌症是全世界主要的公共卫生问题,肺癌位居癌症相关性死亡原因之首,有50多个组织形态学亚型,预后差,其5年生存率不超过15%。肺癌中约85%为非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）。临床上,只有一小部分非小细胞肺癌患者在早期（Ⅰ期或Ⅱ期）被确诊时,才有手术切除的机会,然而超过60%的肺癌患者在确诊时已处于局部进展期或转移（Ⅲ期或Ⅳ期）,丧失了手术机会。直到最近,常规化疗和放疗仍是治疗肺癌患者的主要手段。顺铂是治疗非小细胞肺癌、卵巢癌、前列腺癌、食管癌、膀胱癌等各种癌症的常用药物之一,其通过多种机制发挥抗癌作用,最突出的作用模式为激活DNA损伤反应诱导线粒体凋亡。自上世纪八十年代以来,随着顺铂的广泛应用,人们发现其在化疗初期一般效果显着,但耐药性的出现,严重限制了顺铂的进一步应用,是化疗失败的关键原因。转录因子是一系列能与靶基因上游特定序列发生特异性结合的生物因子,它能够通过调控靶基因的表达进而影响细胞或靶器官的发育、分化、代谢、凋亡等生物过程。转录因子叉头框C1（forkhead box C1,FOXC1）是叉头框（FOX）超家族的一个重要成员,研究指出:FOXC1不仅与鼻咽癌、肝癌、基底样乳腺癌、黑色素瘤、胰腺癌等多种肿瘤的发生、发展有关,还促进癌细胞进一步增殖、迁移和侵袭。既往研究表明FOXC1在NSCLC组织中表达明显高于癌旁正常组织,且与肿瘤分化程度、淋巴结转移及TNM分期相关,沉默FOXC1可抑制A549细胞上皮间质转化的发生,减弱A549细胞的迁移侵袭能力。研究发现FOXC1过度表达可诱导散发型三阴性乳腺癌对蒽环类药物化疗的耐药,但对于siRNA-FOXC1在逆转肺腺癌耐药中的作用,尤其是siRNA-FOXC1对耐药相关蛋白的调控作用尚有待进一步研究。目的本研究以A549细胞为研究对象,观察转染siRNA-FOXC1对顺铂作用下A549细胞增殖、凋亡的影响及相关凋亡蛋白Bcl-2、Bax的变化,探讨siRNA-FOXC1可否通过抑制FOXC1的表达影响A549细胞对顺铂的敏感性,以期为阐明复杂的化疗耐药机制、筛选更有效的抗癌策略提供新的方向和实验依据。材料与方法1.研究对象本研究选用人肺腺癌A549细胞（购自中国科学院上海生命科学研究院细胞库）为对象,将A549细胞培养于含10%胎牛血清的RPMI1640完全培养基中,并将其置于37℃、5%CO2的培养箱中。2.检测方法2.1根据实验目的不同,进行了下列2种分组。j筛选药物作用时间和浓度:分为空白对照组和不同浓度顺铂（0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0、32.0、256.0nmol/L）刺激培养组,作用时间选取24h、48h。k沉默FOXC1后顺铂对A549细胞的影响:分为空白对照组（常规培养,不做任何处理）、转染试剂组（仅给予转染试剂Lip2000）、siRNA-NC转染组（转染siRNA-NC）、siRNA-NC+顺铂组、siRNA-FOXC1组（转染siRNA-FOXC1）、siRNA-FOXC1+顺铂组。2.2细胞转染:取对数生长期的A549细胞,当细胞融合率达60%-70%时,采用脂质体转染技术将siRNA-FOXC1及其阴性对照物（siRNA-NC）转染入细胞A549中。2.3 CCK-8:采用CCK-8法检测转染siRNA-FOXC1前后顺铂对A549细胞增殖抑制率的影响。2.4流式细胞术:采用流式细胞术检测转染siRNA-FOXC1前后顺铂对A549细胞凋亡的影响。2.5 q RT-PCR:采用q RT-PCR法检测转染siRNA-FOXC1前后顺铂对A549细胞中FOXC1、Bcl-2和Bax m RNA表达的影响。2.6 Western Blot:采用Western Blot法检测转染siRNA-FOXC1前后顺铂对A549细胞中FOXC1、Bcl-2和Bax蛋白相对表达量的影响。3.统计学处理采用SPSS 24.0统计软件对所获得数据进行统计分析。均以（?）±s表示,比较两组间细胞增殖抑制率采用独立样本t检验或者校正t检验,采用单因素方差分析（One Way ANOVA）比较6组A549细胞凋亡及FOXC1、Bcl-2和Bax m RNA及蛋白表达水平的差异,两两比较用LSD-t检验,检验水准为α=0.05。结果1.顺铂对A549细胞作用时间和浓度的筛选A549细胞在不同浓度的顺铂作用下,根据其在24h、48h增殖抑制率确定后续实验中顺铂的作用浓度为4.0nmol/L,培养时间为24h。2.转染siRNA-FOXC1后顺铂对各组A549细胞增殖抑制率的影响CCK8检测结果显示:用不同浓度的顺铂处理干扰组细胞,结果显示,siRNA-FOXC1+顺铂组的增殖抑制率明显高于siRNA-NC+顺铂组,差异具有统计学意义（P<0.05）。3.转染siRNA-FOXC1后顺铂对各组A549细胞凋亡的影响流式细胞术检测结果显示:与其它各组相比,siRNA-FOXC1+顺铂组A549细胞凋亡率明显提高,差异具有统计学意义（P<0.05）。4.转染siRNA-FOXC1后顺铂对各组A549细胞中FOXC1、Bcl-2、Bax m RNA及蛋白相对表达情况的影响q RT-PCR和Western Blot检测结果显示:与其它各组相比,siRNA-FOXC1+顺铂组A549细胞中FOXC1和Bcl-2 m RNA及蛋白的相对表达量下降,而BaxmRNA及蛋白的相对表达量上升,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论通过抑制FOXC1表达可提高A549细胞对顺铂化疗的敏感性,为进一步探索肺腺癌对顺铂化疗药物产生抗性的机制提供了新的依据。