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研究目的:肾癌是10种最常见的癌症之一,并且通常对化疗不敏感。大约70%的肾癌患者属于肾透明细胞癌亚型,这些患者中约有四分之一会发生肿瘤转移。因此,研究肾癌的转移机制及其分子调控网络,将有助于了解肾癌转移的机理,从而提高肾癌的治疗效果。研究方法:临床数据库分析,确认肾癌患者中ApoC1的表达;构建高转移细胞株和亲本细胞株,研究肾癌转移与ApoC1的相关性;采用荧光定量PCR技术,研究ApoC1相关上下游信号通路mRNA的表达水平;沉默ApoC1采用siRNA转染方法;采用病毒转染技术高表达ApoC1;Western blot考察ApoC1及转移相关蛋白的表达;transwell和伤口愈合实验考察肾癌细胞迁移侵袭能力;SRB法研究高低表ApoC1的肾癌细胞的增殖;免疫共沉淀技术研究ApoC1与STAT3的结合情况;核质分离法观察STAT3激活入核情况;免疫荧光实验观察ApoC1和STAT3在核内外共分布情况;采用HUVEC细胞与肾癌细胞共培养,研究ApoC1是否与血管生成相关;PET-CT技术研究裸鼠体内肿瘤转移情况。研究结果:(1)ApoC1的表达与肾透明细胞癌不良预后的相关性我们通过Oncomine数据库挖掘发现,与正常组织相比,ApoC1在多种实体瘤患者组织中呈现高表达,尤其以肾癌患者组织中的差异表达最为明显,UALCAN数据库结果显示ApoC1随着肾癌的进程呈递增表达,以上提示ApoC1的表达与肾癌发生发展相关。基于TCGA数据库的检索分析显示,ApoC1高表达的肾癌患者相比于低表达的患者生存期显著缩短。提示ApoC1与肾癌不良预后有关。(2)ApoC1与ccRCC细胞的转移相关transwell和伤口愈合实验表明:沉默ApoC1能抑制ccRCC细胞的迁移侵袭能力,同时抑制EMT的发生,表现为E-cadherin表达增加和N-cadherin表达减少。相反,ApoC1高表达能促进ccRCC细胞的迁移侵袭能力,同时诱导EMT的发生,表现为E-cadherin表达减少和N-cadherin表达增加。裸鼠体内实验也证实ApoC1高表达ccRCC细胞相比于正常ccRCC细胞转移能力显著增强,提示ApoC1参与肾癌的转移。(3)ApoC1激活STAT3促进ccRCC转移通过对ccRCC细胞进行油红染色,发现ApoC1促进肾癌转移与ccRCC细胞内脂质的含量可能无关。接着,通过检测高表达ApoC1的ccRCC细胞转移相关的信号通路蛋白的mRNA表达,发现高表达ApoC1激活STAT3信号通路蛋白的mRNA表达,提示STAT3可能参与ApoC1介导的ccRCC转移。Western blot比较高低表达ApoC1对STAT3激活的影响,发现ApoC1增加STAT3的磷酸化激活。同样,ApoC1能促进STAT3的入核。免疫沉淀证实ApoC1与STAT3在ccRCC细胞内会发生结合,免疫荧光证明ApoC1和STAT3存在共定位。STAT3抑制剂和STAT3 siRNA能逆转ApoC1所促进的ccRCC转移。(4)ApoC1经外泌体分泌促进ccRCC转移ApoC1能促进血管内皮细胞HUVEC的迁移运动能力和STAT3的激活。ccRCC细胞与HUVEC细胞共培养实验显示:ccRCC细胞能经外泌体分泌ApoC1促进血管内皮细胞的迁移运动能力和STAT3的激活。(5)DPP-4抑制能逆转ApoC1所促进的ccRCC转移鉴于目前尚无有效的ApoC1抑制剂,而文献报道认为DPP-4抑制能降低ApoC1的表达,因此DPP-4可能是干预ApoC1表达的有效靶点。我们的结果发现DPP-4抑制剂或敲除DPP-4能逆转由ApoC1所促进的ccRCC迁移和STAT3的激活。研究结论:ApoC1在肾癌病人样本中异常高表达,ApoC1能通过结合并激活STAT3促进ccRCC细胞的转移能力,ccRCC细胞能经外泌体分泌ApoC1促进血管内皮细胞的迁移运动能力和STAT3的激活,干预DPP-4抑制ApoC1所促进的ccRCC转移。本研究发现的ApoC1-STAT3信号通路为肾癌的治疗提供了潜在治疗靶点和新的干预策略。